Zellkultur

katrin34 · Gast

Meine Frage:
Hallo! Ich brauche mal eure Hilfe. und zwar bezüglich Zellkulturen. Wir haben das Medium RMPI, worin auch Phenolrot enthalten ist. dieses sorgt für einen farbumschlaf von rotes zu gelbes medium, wenn die zellen wachsen. aber warum ist das so? hab gelesen dass es was mit der ansäuerung zu tun hat. aber warum kommt es zur ansäuerung?
hoffe ihr könnt mir helfen.

Meine Ideen:
danke

Firelion · Anmeldungsdatum: 27.08.2009 Beiträge: 1878

Hi,

soweit ich weiß liegt das an den Metaboliten der Zellen wie z.B. Laktat.
Wenn das Medium lange auf den Zellen drauf ist sammeln sich diese Metaboliten an und die Pufferkapazotät des Systems ist überschritten und es kommt zur Ansäuerung des Mediums.

LG Firelion

katrin34 · Gast

was meinst du damit die pufferkapazität ist überschritten?
und dann noch eine frage. warum sammeln sich die Zellen in kulturflaschen eher am Rand an als in der Mitte?

Firelion · Anmeldungsdatum: 27.08.2009 Beiträge: 1878

In de Medium ist wahrscheinlich eine gewisse Menge Phosphst enthalten. Phosphat kann als Puffer wirken, d.h. es kann das Hinzukommen oder den Verlust einer gewissen Menge Protonen also H+ kompemsieren indem es H+ abgibt oder aufnimmt. Das heißt selbst, wenn x Protonen hinzukommen oder ,,verloren" gehen bleibt der pH Wert stabil. Aber wenn x+1 Protonen hinzukommen oder verloren gehen kann das der Puffer nicht mehr kompensieren und dann ist ein Proton ist dann zuviel oder zu wenig vorhanden. Und irgendwann ändert sivh dann eben der pH Wert.
Also x Moleküle Laktat/Pyruvat kein Problem, x+y Moleküle Laktat/Pyruvat: Ansäerung und damit Änderung des pH Wertes und Farbumschlag des Indikators-

Zu den Zellkulturflaschen: Vielleicht sind die nicht ganz ebenmäßig oder die Zellen adheriere an der Flasche?

Katrin34 · Gast

Ja also es handelt sich dabei um adhärente Zellen. Und die adhärieren immer eher am Rand versteh ich das richtig. Und der Grund dafür liegt eventuell in der oberflächenstruktur der Flasche, ja?

jörg · Anmeldungsdatum: 12.12.2010 Beiträge: 2107 Wohnort: Bückeburg

katrin34 · Gast

ich hab hybridomzellen und myelomzellen.
und wenn man jetzt schaut wie vital die zellen sind. dann müsste das doch im zusammenhang mit der besetzungsdichte stehen oder? also ich meine wenn die vitalität sinkt, müsste theoretisch auch besetzungsdichte sinken oder hab ich da einen denkfehler?
und wenn das medien orange gefärbt, heiß es doch das die zellen nicht wachsen, richtig?

jörg · Anmeldungsdatum: 12.12.2010 Beiträge: 2107 Wohnort: Bückeburg

InCelligence · Anmeldungsdatum: 08.09.2014 Beiträge: 5 Wohnort: Bremen

Hi,

wenn deine Zellen in Flaschen oder Schalen ungleich verteilt sind, kann das daran liegen, das du nicht gut gemischt hast oder dass dein Zellkulturplastik nicht so gut behandelt ist.
Schau mal hier sind Beispiele wie sowas aussehen kann:
http://www.incelligence.de/zellkultur/zellkultur-plastik

Ansonsten würde ich gerne zu Jörgs super Kommentaren noch anfügen, dass oft Vitalität und Viabilität als Synonyme genutzt werden. Das kommt wahrscheinlich von den englischen begriffen vitality und viability. Die Vitalität kann man mit Vitalfarbstoffen wie Trypanblau bestimmen und gibt dann einen Prozentsatz an.

Du kannst also eine volle Flasche haben, die 5% tote Zellen enthält oder eine volle Flasche mit 15% toten Zellen. Wenn die Vitalität runter geht, geht aber meistens auch die Wachstumsgeschwindigkeit runter.