"Plasmidisolation", "Reinheitsbestimmung und

minmin · Anmeldungsdatum: 16.10.2007 Beiträge: 1 Wohnort: Altenriet

Wir haben in der Schule Plasmide isoliert und eine fotometrische Messung gemacht. Wir müssen dazu ein (ausführliches) Protokoll schreiben, haben allerdings ein paar Verständnisprobleme.... T_T

Zum einen müssen wir ein "Flussdiagramm zur Plasmidisolation" machen..und verstehen nicht was wir in diesem Arbeitsblatt ausfüllen sollen (da hats Felder mit Abzweigungen im ersten steht "Bakterien" im letzten "Agarosegel")

Dann müssen wir die Extinktion ausrechnen bei 260, 280 und 325nm. Wir wissen nicht, wie wir es ausrechnen sollen, weil wir nur die Werte aus dem Fotometer haben (wissen nicht einmal was das überhaupt für Werte sind) und wie man den Verdünnungsfaktor von der Plasmidlösung ausrechnet.

Bitte! Bitte! HELFT UNS!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
Danke im Vorraus ^^

Bert · Anmeldungsdatum: 26.09.2007 Beiträge: 82 Wohnort: Niedersachsen

Hallo minmin.

Ich helfe euch gern!

Da müßte ich wissen, nach welcher Methode ihr die Plasmid-DNA isoliert habt ... Aus einer Zellkultur? Aus einem Agarosegel?
Was habt ihr da gemacht?

Extinktion ausrechnen

Wie habt ihr gemessen? Gerät? In Quarzküvetten? Schichtdicke der Küvette? Oder alles automatisch?

Wieviel DNA (Konzentration in g/L oder molar) entspricht der Extinktion_bei_260_nm = 1?
z.B. Extinktion_bei_260_nm = 1 entspricht 50 µg/ml dsDNA oder 33 µg/ml ssDNA (wenn bei pH 7 gemessen wird; welchen pH-Wert hat der Puffer, in dem die DNA gelöst ist?)
Was sind das für Plasmide? ds oder ss?
Wieviel Plasmid-DNA (Volumen) habt ihr für die Messung genommen? Wieviel war in der Küvette insgesamt (Volumen)? Das ergibt den Verdünnungsfaktor.

z.B. es war dsPlasmid-DNA in TE pH 7;
ihr habt 5 µl Plasmid-DNA + 995 µl TE in der Küvette gehabt (Gesamtvolumen = 1000 µl);
euer Meßwert: Extinktion_bei_260_nm = 0,12;
Dann ist die DNA-Konzentration = 0,12 x 50 x 1000/5 = 1200 µg/ml = 1,2 g/L

Agarosegel: Habt ihr eine elektrophoretische Trennung gemacht?

Versuch, wieviel ihr alleine schafft. Wenn es Schwierigkeiten gibt, melde dich.