plasmide

viola · Anmeldungsdatum: 20.01.2008 Beiträge: 2

hallo!

ich als bio-neuling muß ein referat über plasmide halten. Mit den generellen infos hab ich ja kein problem. ich habe allerdings als stichworte: selektionssysteme und promotoren bekommen. und da liegt mein problem!

gehts bei den selektionssystemen zb um antibiotika-resistenzgene? also um zu schauen ob meine dna-übertragung erfolgreich war? oder steht das für etwas ganz anderes?
und bei den promotoren hab ich keine ahnung welche da gemeint sein könnten! lac, trp, tac? ich hab keinen anhaltspunkt... unglücklich

kann mir jemand helfen?

lg viola

nangillala · Anmeldungsdatum: 20.01.2008 Beiträge: 11

Hi,
hast du wirklich nur die beiden Worte bekommen oder noch ein bisschen mehr Erklärung? Davon ausgehend würde ich die Selektion genauso verstehen wie du. Es gibt bspw. Plasmide, welche nur mit Insert überleben können (pZero wenn ich nicht irre), wenn du nun etwas inserierst kannst du ganz einfach sehen ob es geklappt hat. Wenn du Bakterien auf erfolgte Transformation eines Plasmides überprüfen möchtest ist eine gängige Methode ein Plasmid als Carrier für das Insert zu nutzen, welches eine oder besser mehrere Antibiotika Resistenzen hat. So kannst du später deine (hoffentlich erfolgreich mit Insert versehenen) Bakterienkolonien auf Agar mit Antibiotika plattieren. Alle Bakterien ohne Insert sollten im Normalfall (kommt halt drauf an wie stark man selektiert) sterben.

revilo · Anmeldungsdatum: 13.12.2007 Beiträge: 79

Als Selektionssysteme würde ich auch Resistenzgene, die die Resistenz gegenüber Antibiotika vermitteln, verstehen.
Darüberhinaus gibt es ein weiteres Selektionssystem: Blau-Weiß-Screening. Bakterien, die erfolgreich transfiziert wurden (d.h. in die das Plasmid erfolgreich eingebracht wurden), sind in der Lage ein spezielles Substrat umzusetzen, dabei entsteht ein blauer Farbstoff, d.h. die erfolgreich transfizierte Bakterienkolonie ist blau und lässt sich von nicht transfizierten Kolonien, die weiß sind, auf dem Nährboden unterscheiden.
Promotoren sind die Bereiche in der DNA, an die RNA-Polymerase bindet, um die Transkription einzuleiten. Damit erklärt sich, wozu du den Promotor im Plasmid benötigst: Möchtest du ein bestimmtes Protein in E.coli exprimieren, musst du die entsprechende Protein kodierende Sequenz hinter einen Promotor klonieren, der in E.coli aktiv ist.
Es gibt auch Plasmide zur Herstellung von Proteinen in Säugetierzellen, hier benötigst du auch einen Promotor, der aber in Säugetierzellen aktiv ist, z.B. einen Viruspromotor, CMV-Promotor.
In Pflanzen benötigst du einen Pflanzenpromotor usw.....
Du kannst letzlich jeden Promotor einsetzen, der im jeweiligen Organismus aktiv ist, den du transfizieren möchtest.

viola · Anmeldungsdatum: 20.01.2008 Beiträge: 2

ich habe nur die beiden stichworte bekommen...

danke sehr für eure hilfe! mein kloß im bauch ist jetzt um einiges kleiner Big Laugh

liebe grüße+schönen sonntag noch!
viola