Re-proben einer IP

Michaela. · Anmeldungsdatum: 22.11.2007 Beiträge: 7

Hallo

wenn ich eine IP mache, d.h. ein Protein aus einem Lysat mittels eines spezifischen Antikörpers raushole und danach ganz normal einen Western fahre und mir mein ip-tes Protein anschaue, ist es dann möglich diesen Blot zu re-proben auf a-Tubulin zb?

Oder sehe ich auf so einem Blot dann eben nur das ip-te Protein und ggf. die Proteine, die an diesem Protein dranhängen (also co-IP)? grübelnd

Einen Blot mit den Proben einer IP kann man nicht re-proben oder?

Bitte um rasche Hilfe.
Danke

elementum · Ehrenmitglied Anmeldungsdatum: 30.04.2006 Beiträge: 485 Wohnort: HD

Hi,

prinzipiell kann man einen Blot nach einer IP re-proben. das macht auch durchaus sinn, da du so ggf nachprüfen kannst, ob dein in der IP eingesetzter AK wirklich spezifisch bindet oder dir einfach alles mögliche aus dem extrakt holt.

was die auf dem blot befindlichen proteine betrifft, so befinden sich (bei einem wirklich spezifischen AK) natürlich nur die IP- bzw coIP- Proteine und nichts anderes mehr.

MfG,
elementum

Michaela. · Anmeldungsdatum: 22.11.2007 Beiträge: 7

Danke, so hatte ich es mir auch gedacht.

Also kann man einen Blot mit einer IP nicht auf zb a-Tubulin reproben oder (können kann man schon, ich meine halt, ob man ein Ergebnis kriegt) ? Hilfe

Oder halt auf irgendein anderes Protein, da man sich ja bei einer IP extra nur 1 Protein plus ggf. das interagierende Protein aus einem Totallysat rausholt.

Danke!

elementum · Ehrenmitglied Anmeldungsdatum: 30.04.2006 Beiträge: 485 Wohnort: HD

wenn du in deiner IP beta-tubulin präzipitiert hast (oder ein anderes protein welches - vermutlich - mit alpha tubulin interargiert), dann macht es durchaus sinn, den western mit alpha-tubulin spezifischen AKs zu reproben.

hat dein präzipitiertes protein allerdings rein garnichts mit tubulin zu tun, dann ist es natürlich auch sinnfrei, den blot auf tubulin zu testen.

und ob du ein ergebnis bekommst hängt eben NUR davon ab, ob das protein, welches du im western versuchst nachzuweisen, auch auf der membran ist. ist es nicht drauf, dann bekommst du natürlich auch kein ergebnis.

ich hoffe darauf wolltest du hinaus. wenn nicht, dann verstehe ich deine frage nicht wirklich... entweder zu "komsich" gestellt oder es liegt -auf irgend eine weise- auf der hand...

MfG,
elementum