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Succinat
Anmeldungsdatum: 26.10.2009
Beiträge: 11
Wohnort: Sauerland
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 Verfasst am: 12. März 2011 11:54 Titel: Biotechnik |
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Hallo,
ich habe mal eine Frage und ich hoffe sie ist nicht zu 'biochemisch' für dieses Forum :o
Also wir beschäftigen uns im Unterricht momentan mit Austauschergruppen (Anionenaustauscher/Kationenaustauscher). Hiermit ist es ja möglich Aminosäuren oder ganze Proteine, also auch Enzyme, aufzureinigen.
Unser Lehrer meinte jetzt das in der Klausur nächste Woche eine Transferaufgabe dran kommen könnte, in der man Enzyme ebenfalls aufreinigt, jeodoch mittels kompetitiven Inhibitoren.
Wie kann ich mir das vorstellen? Wie kann man mittels Inhibitoren Enzyme aufreinigen?
Vielleicht kann mir ja einer von euch was dazu sagen.
Vielen Danke schon mal (:
Flo |
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jörg
Anmeldungsdatum: 12.12.2010
Beiträge: 2107
Wohnort: Bückeburg
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| Verfasst am: 12. März 2011 12:54 Titel: |
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In welcher Klasse bist du denn?
Hierbei geht es weniger um die Eigenschaft des kompetitiven Inhibitors bezüglich der Funktion des Enzyms (also dass er es hemmt), als vielmehr um die Bindungseigenschaften dieses Stoffes.
Erkläre doch bitte einmal, wie (also z.B. an welcher "Stelle") kompetetive Inhibitoren am Enzym binden.
Kennst du andere Möglichkeiten der gezielten Aufreinigung spezieller Proteine?
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RNA?- just another nucleic acid? |
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Succinat
Anmeldungsdatum: 26.10.2009
Beiträge: 11
Wohnort: Sauerland
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| Verfasst am: 12. März 2011 15:31 Titel: |
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ich habe die drei jährige bta- ausbildung gemacht und jetzt mach ich mein vollabi (technikbezogen). So ein spezielles angebot meiner schule(;
ja in diesem fall haben wir nur das konkurrieren des hemmstoffes und dem substrat um das aktive zentrum besprochen.
es wird also auf diese inhibierung dann auslaufen
aber wie gesagt, ich kann mir nicht vorstellen wie man mehrere, verschiedene enzyme 'einzelnt' bekommt (also die verschiedenen 'arten'), nur durch inhibierung.
bei proteinen, wo man dann mit elektrostatischen wechselwirkungen arbeitet, versteh ich das ja^^ |
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jörg
Anmeldungsdatum: 12.12.2010
Beiträge: 2107
Wohnort: Bückeburg
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| Verfasst am: 12. März 2011 15:54 Titel: |
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| Succinat hat Folgendes geschrieben: | | das konkurrieren des hemmstoffes und dem substrat um das aktive zentrum |
Genau, der kompetitive Inhibitor bindet am aktiven Zentrum.
"Befestigt" man diesen nun an einer Matrix (z.B. beads), kann man damit selektiv Enzyme aus einer "Eiweissbrühe fischen", da das Enzym dann daran bindet.
Reinigt man dann die Matrix von dem ganzen unselektiv daran gebundenen Zeug, kann nachher das nun reine Protein daraus gelöst werden.
Je höher dabei die Selektivität des gebundenen Stoffes für "sein" in diesem Fall Protein, desto "reiner" nachher die Lösung und je höher die Affinität bzw. je geringer die Menge an Kompetitoren in der Lösung, desto mehr von dem gewünschten Protein kann aus der Lösung extrahiert werden.
Es muss sich um einen Stoff handeln, der nicht durch das Enzym gespalten werden kann, damit jenes nicht wieder dissoziiert, sondern daran gebunden bleibt. Diese Eigenschaft ist eher von Inhibitoren zu erwarten..
Eine weitere (nicht nur für Enzyme, sondern für jedes beliebige Protein gültige und wesentliche verbreitetere, aber eben auch kostenaufwendigere Methode) wäre die selektive Aufreinigung über z.B. Antikörper, die an einer Matrix gebunden sind.
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RNA?- just another nucleic acid? |
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Succinat
Anmeldungsdatum: 26.10.2009
Beiträge: 11
Wohnort: Sauerland
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| Verfasst am: 13. März 2011 18:49 Titel: |
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okey das klingt nachvollziehbar. danke!
ja mit antikörpern habe ich mir das auch schon überlegt. mir kommt da immer der ELISA- test in den kopf(; oder wie der hieß
aber was mit antikörpern wird definitiv nichts dran kommen. da ist die erste variante wahrscheinlicher.
danke nochmal(: |
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jörg
Anmeldungsdatum: 12.12.2010
Beiträge: 2107
Wohnort: Bückeburg
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| Verfasst am: 13. März 2011 18:58 Titel: |
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Aber Vorsicht!
Der ELISA ist ein Nachweisverfahren für bestimmte Antigene, also per definitionem kein Aufreinigungsverfahren, auch wenn das Interaktionsprinzip im Prinzip das gleiche ist (Antigen- Antikörperbindung).
Aber dieses biologische Prinzip findet in verschiedenen Technologien Anwendung, so z.B. auch beim western- blot, Radioimmunassay u.v.a.
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