Restriktionsenzyme

Gast12345 · Gast

Frage:
Man möchte ein humanes Gen in e.coli exprimieren. dazu muss man das entsprechende pcr fragment in ein geeignetes expressionsplasmid klonieren..
man hat die wahl zwischen folgenden restriktionsenzymen:

1) restriktionsenzym, dass stumpfe enden erzeugt
2) restriktionsenzym, dass überhang (sticky ends) erzeugt
3) 2 versch. restriktionsenzyme, die unterschiedliche überhänge erzeugen
4) 2 versch. restriktionsenzyme, die beide stumpfe enden erzeugen

was ist davon am besten und wieso?

ich finde nirgends was dazu. nur dass sich sticky ends leichter durch die ligase verbinden lassen.
stumpfe enden bedeutet ja ein gerade schnitt

wär froh wenn mir jemand helfen kann

Jaamar · Anmeldungsdatum: 14.06.2010 Beiträge: 119

versuch dir mal zu überlegen, was passiert, wenn du gen + vektor mit den von dir genannten möglichkeiten schneidest und dann ligierst.
wichtig ist dabei die anzahl der möglichkeiten, wie etwas eingebaut (richtungen) werden kann.
denn das konstrukt wird nur funktionieren, wenn das insert in der richtigen richtung eingeführt wurde.
also, wieviele möglichkeiten des einbauen gibt es bei:
1)
2)
3)
4)
?
kleines beispiel zu 1.)
bei glatten schnitten gibt es 4 möglichkeiten wie das insert eingebaut werden kann und 2 möglichkeiten wie die DNA recyklieren kann. aber nur eine davon wollen wir haben, also ist diese möglichkeit schlecht.

hoffe das hilft dir ein bisschen weiter. wenn nicht, sag einfach nochmal bescheid :-)

Gast12345 · Gast

danke schonmal :-)

1) restriktionsenzym, dass stumpfe enden erzeugt
2) restriktionsenzym, dass überhang (sticky ends) erzeugt
3) 2 versch. restriktionsenzyme, die unterschiedliche überhänge erzeugen
4) 2 versch. restriktionsenzyme, die beide stumpfe enden erzeugen

könntest du mal schauen ob das dann so stimmt?

1) 4 einbaumöglichkeiten, 2 möglichkeiten recyklieren
2) 2 einbaumöglichkeiten, 1 möglichkeit zum recyklieren
3) 1 einbaumöglichkeit, kann nicht recyklieren
4) ?

bei 4 kann ich mir jetzt irgendwie kein bild im kopf vorstellen..
wenns 2 verschiedene restriktionsenzyme sind kanns schonmal nicht recyclieren oder? und einbaumöglichkeiten gibts dann 2?

dann wäre Methode 3 am besten..dann 4, 2..und 1 am schlechtesten

liebe grüße

Jaamar · Anmeldungsdatum: 14.06.2010 Beiträge: 119

genau!
bei 4) verhält es sich so wie bei 1), glatt = glatt