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lizzy44
Gast
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 Verfasst am: 21. Okt 2011 17:24 Titel: yeast-two-hybrid-system |
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Meine Frage:
hallo!!!
kann mir bitte jemand leicht verständlich und ausführlich das yeast-two-hybrid-system erklären?
Ich hab schon überall im internet gesucht und gelesen aber ich versteh es einfach nicht...wäre schön wenn mir jemand helfen könnte!
Meine Ideen:
danke schon mal! |
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lizzy44
Gast
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| Verfasst am: 22. Okt 2011 21:48 Titel: |
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hat wirklich keiner eine ahnung? ich brauch dringend hilfe!!!! |
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PaGe
Moderator
Anmeldungsdatum: 19.03.2007
Beiträge: 3549
Wohnort: Hannover
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| Verfasst am: 22. Okt 2011 23:22 Titel: |
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Das ist eine ziemlich komplexe Technik. Hast du dir den Wiki-Artikel schon mal durchgelesen?
Es wäre gut, wenn du beschreiben könnest, was du schon weißt. Außerdem gehe ich jetzt mal davon aus, dass du studierst, da das Thema in der Schule eher weniger eine Rolle spielt. Oder bist du in der Ausbildung?
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Die deutsche Rechtschreibung ist Freeware, du darfst sie kostenlos nutzen. Aber sie ist nicht Open Source, d. h., du darfst sie nicht verändern oder in veränderter Form veröffentlichen. |
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lizzy44
Gast
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| Verfasst am: 23. Okt 2011 10:19 Titel: |
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genau ich studiere...
und das problem ist dass ich das eben so gar nicht verstehe. Ich hab mit dazu auch schon wiki durchgelesen. und ich versteh eigentlich nur wie die fusionproteine aufgebaut sind. aber dann kommen ja irgendwie noch plasmide ins spiel.. aber warum? und dann noch das lacZ-Gen...und dann auch warum brauch man denn dafür fusionsproteine?
vielleicht stell ich mich auch einfach zu doof an, aber es wäre wirklich toll wenn mir jemand hierbei helfen könnte! |
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PaGe
Moderator
Anmeldungsdatum: 19.03.2007
Beiträge: 3549
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lizzy44
Gast
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| Verfasst am: 23. Okt 2011 13:34 Titel: |
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ok also so einigermaßen hab ich das jetzt kapiert...
nur noch eine sachen:
und zwar wenn ich eine cDNA-Bibliothek benutze. warum wird mRNA in cDNA umgewandelt? ich kann mir auch nicht richtig was unter der cDNA vorstellen...hab auch schon überall im internet gelesen aber irgendwie hilft das nicht viel...
und dann noch was:
ich will jetzt die WEchselwirkung zwischen proteinen testen. dazu hab ich ein bekanntes plasmid (bait) was ich in hefe einbringe und dort wird das protein dann ja exprimiert. so und nun will ich ja die WW dieses Proteins mit anderen testen. dazu nehme ich eine cDNA-bibliothek. und die cDNA muss ja erst in plasmid integriert werden und dann ebenfalls in hefe eingeschleust werden. und dann werden die proteine die durch die cDNA kodiert werden doch auch exprimiert oder? ist das so richtig ausgedrückt? Bitte korrigiert mich wenn es falsch ist! und dann ist es ja so dass wenn die proteine interagieren die zellen zu kolonien wachsen (auf bestimmtes medium). und um die interaktionspartner zu identifizieren isoliere ich die wachsenden kolonien und sequenziere die cDNA. aber ich isoliere doch dann die cDNA von der hefe oder? aber ich will ja eigentlich das protein identifizieren? und ist mit der cDNA die normale DNA gemeint? das sind so die punkte bei denen ich nocht nicht weiterkomme... |
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PaGe
Moderator
Anmeldungsdatum: 19.03.2007
Beiträge: 3549
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| Verfasst am: 23. Okt 2011 18:03 Titel: |
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Es geht ja um Proteine, daher muss mRNA verwendet werden, da diese die Proteine codiert. Da man aber für die Synthese der mRNA eine DNA braucht, muss erst anhand der mRNA eine komplementäre DNA (=> cDNA) hergestellt werden. Bei der original-DNA müsste man ja erst einmal die richtige Stelle finden und die Introns könnten die DNA-Sequenz unnötig aufblähen und könnte ggf. in der Hefe sogar "falsch" gespiced werden.
In ein Plasmid führst du nur die DNA für ein Protein ein und nicht eine ganze Bibliothek. Wenn das Plasmid aufgenommen wurde, wird es expremiert. Wenn die Kolonie wächst, weißt du die Sequenz des Proteins entweder schon oder kannst das Plasmid sequenzieren und das Protein damit bestimmen.
Eine Anmerkung noch:
Bei bait und prey bezieht man sich auf die Proteine, nicht auf Plasmide.
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lizzy44
Gast
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| Verfasst am: 23. Okt 2011 18:48 Titel: |
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aber was ich nicht verstehe ist ja dass man wohl anstelle eines proteins gleich ganz viele proteine testen kann.und dafür nutzt man irgendwie eine cDNA-bibliothek...aber wie soll das gehen wenn in ein plasmid nur die dna für ein protein kommt? oder verwendet man dann ganz viele plasmide in denen dann jeweils die dna für ein protein reinkommt?
aber es gibt doch auch polycistronische mRNAs...und die codieren ja für mehrere proteine. muss man hier dann auch erst die dna für die einzelnen proteine isolieren? aber wie soll das funktionieren?
und dann noch eine sache zur cDNA:
du meintest: "Da man aber für die Synthese der mRNA eine DNA braucht, muss erst anhand der mRNA eine komplementäre DNA (=> cDNA) hergestellt werden
ich hab doch dann schon die mRNA warum muss ich die dann noch mal synthetisieren?
noch eine verständnisfrage: ein plasmid enthält ja genetischen material oder? das heißt man könnte sagen das genetische material des plasmid wird exprimiert?("Wenn das Plasmid aufgenommen wurde, wird es expremiert.")
tut mir leid dass ich solange brauche um das zu verstehen  |
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PaGe
Moderator
Anmeldungsdatum: 19.03.2007
Beiträge: 3549
Wohnort: Hannover
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| Verfasst am: 23. Okt 2011 19:02 Titel: |
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| lizzy44 hat Folgendes geschrieben: | | aber was ich nicht verstehe ist ja dass man wohl anstelle eines proteins gleich ganz viele proteine testen kann.und dafür nutzt man irgendwie eine cDNA-bibliothek...aber wie soll das gehen wenn in ein plasmid nur die dna für ein protein kommt? oder verwendet man dann ganz viele plasmide in denen dann jeweils die dna für ein protein reinkommt? |
Genau. So viele Plasmide, wie man Proteine testen will. Plasmide dürfen auch nicht zu groß sein, da sie sonst nicht aufgenommen und richtig repliziert werden können.
| Zitat: |
aber es gibt doch auch polycistronische mRNAs...und die codieren ja für mehrere proteine. muss man hier dann auch erst die dna für die einzelnen proteine isolieren? aber wie soll das funktionieren? |
Man untersucht ja in der Regel eukaryotische Proteine. Und da sind polycistronische mRNAs eher selten. Wenn man diese untersuchen will, muss man wirklich die mRNAs in die einzelnen Gene zerschneiden. Da man Fusionsproteine herstellen muss, würde man immer nur das letzte oder erste Protein beim Cistron erfassen, da der Fusionsproteinanteil sich am Anfang oder Ende befindet. Unbedingt dabei beachten: Das Protein in der Hefe besteht aus zwei kovalent miteinander verbundenen Proteinenteilen, dem Fusionsprotein und dem untersuchten Protein(anteil), die im Plasmid direkt hintereinander liegen und kein Stopp dazwischen liegt.
| Zitat: | und dann noch eine sache zur cDNA:
du meintest: "Da man aber für die Synthese der mRNA eine DNA braucht, muss erst anhand der mRNA eine komplementäre DNA (=> cDNA) hergestellt werden
ich hab doch dann schon die mRNA warum muss ich die dann noch mal synthetisieren? |
Du hast nur eine mRNA, die innerhalb einer bestimmten Zeit abgebaut wird. Wenn sich die Zelle teilt, hat keine von beiden mehr etwas, da sie dann schon längst abgebaut ist. Die Information muss in der DNA verankert sein, damit sie vererbt werden kann.
| Zitat: | noch eine verständnisfrage: ein plasmid enthält ja genetischen material oder? das heißt man könnte sagen das genetische material des plasmid wird exprimiert?("Wenn das Plasmid aufgenommen wurde, wird es expremiert.")
tut mir leid dass ich solange brauche um das zu verstehen |
Plasmide sind Erbmaterial. Ich bin etwas entsetzt, dass du das nicht schon weißt. In welchem Semester und an welcher Uni bist du denn?
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lizzy44
Gast
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| Verfasst am: 23. Okt 2011 19:17 Titel: |
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ok...also das hab ich soweit alles verstanden.
und dann noch eine sache:
welche rolle spielen denn eigentlich tryptophan, leucin und histidin bei hefen? sie diese wichtig für das Wachstum?
denn damit wird ja nachgewiesen ob die proteine letztlich miteinander interagieren... |
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PaGe
Moderator
Anmeldungsdatum: 19.03.2007
Beiträge: 3549
Wohnort: Hannover
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| Verfasst am: 23. Okt 2011 19:31 Titel: |
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 Das sind Aminosäuren. Ohne AS kein Protein. Ohne Proteine kein Leben.
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lizzy44
Gast
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| Verfasst am: 23. Okt 2011 19:35 Titel: |
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oh richtig...
dann danke für deine hilfe und geduld!  |
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