patch clamp

Nadine · Anmeldungsdatum: 23.03.2005 Beiträge: 75

Hallo!!!

Ich muß morgen ein Protokoll über einen von uns per Computersimulation durchgeführten Patch Clamp versuch abgeben.
Ich weiß zwar worum es beim Patch Clamp geht und weitgehend auch was da abläuft, aberich habe trotzdem Probleme bei der Auswertung!

Wir haben einmal standart lösung in der Pipette gehabt und dann stimuli von -70 mV ( Nullpotential) bis 30 mV auf die Zelle ( Rattenretina) wirken lassen. Jetzt weiß ich aber nicht woran ich erkenne, welche ionenkanäle gerade offen sind und welche geschlossen sind!
In den darauf folgenden teilen haben wir die Ionenkänale geblockt mit fogeden Lösungen in der Pipette:
TEA ( K+ Kanal blocker) / TTX ( Na Kanal blocker)
dann mit Nifedipine ( Ca Kanal blocker)/ TEA
dann mit Nifedipine/TTX
und zum schluß mit niedrigem Kalium innen gegen Nifedipine/TTX außen.

Hier nun das gleiche Problem wie beim ersten versuch: welche Kanäle sind wann offen und woran erkenne ich das????

Hoffe mir kann einer helfen Hilfe

Grüße Nadine

Noctu

Welche Art von PC habt ihr durchgeführt, es wäre für die Auswertung noch interessant ob ihr ein "inside out" , "outside in" oder whole-cell Clamp gemacht habt.
Prinzipiell kann man sagen dass es um die Geschwindigkeit der Kanäle geht. Na-Kanäle öffnen sehr schnell , schnelle Spannungsänderung, K+, Ca eher langsamer, Ca evt. sogar second messenger ( wenn ich mich recht erinnere ) Du musst nur die Graphen vergleichen , ohne alles = Kontrolle, dann mit den versch. Blockern. Dann kannst Du sehen welches Signal vom Na+ -Signal überlagert wird.

Nadine · Anmeldungsdatum: 23.03.2005 Beiträge: 75

wirhaben whole patch clam verwendet!!! Aber deine Antwort hat mich auf jeden Fall jetzt schon weiter gebracht!!!

Danke... smile