Hybridiserung, Restriktionkarten

iceicelady · Anmeldungsdatum: 01.10.2005 Beiträge: 50

Hallo!

Ich hätte da ein paar Fragen
vielleicht kann mir jemand zumindets einen Anhaltspunkt geben;

1) "Speziesvergleiche durch Hybridisierung:
Sie machen genomische Southern Blots mit DNA aus verschiedenen Spezies: Mensch, Maus, Rind, Krokodil und HEfe.
ab) Sie verwenden zwei verschiedene Sonden: auf einem Blot cDNA für menschmliches Haemoglobin alpha, auf dem anderen menschliches Cyklin a, ein wichtiges hoch konserviertes Zellzyklusgen. Sie hybridisieren Ihre Blots mit den beiden Proben über Nacht unter "Standardbedingungen", d.h. so, dass Sequenzen, die bis zu 20% Mismatches haben, noch hybridisieren.
Erwarten Sie Banden? In wlechen DNAs? Warum?

c) Sie hybridisieren bei höherer und tieferer Temperatur - was erwarten Sie dass sich im Vergleich zu a) ändert?
mehr BAnden oder weniger? wo spezifisch?

d) Sie hybridisieren 10 Minuten mit einer humanden Alu Sequenz? Was erwarten Sie?

Danke für jede Antwort !

2) ad Restriktionkarten:
Was gehört alles zur cDNA?
Muss man Exons, nicht codierende Teile von Exons, Teile, die gechnitten wurden und/ oder repetitive Sequenzen von der cDNA ausschließen (was gehört nicht zur cDNA)?

3) ad PCR:
Macht es einen Unterschied, ob sich die Base (ist falsch) am 5´oder am 3´-Ende des Primers befindet? Wenn ja, warum?
Was ist das Resultat, wenn man statt 2 Primern nur einen 1 Primer verwendet hat?

4) Wie kann man eine cDNA-Probe so modifizieren, dass man weniger Hybridisierung (sprich weniger Schmier) hat, die nicht vom analysierten Locus kommt? Wie und warum?

Vielen Dank Wink