Jaamar
Anmeldungsdatum: 14.06.2010 Beiträge: 119
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Verfasst am: 27. Nov 2012 18:55 Titel: Yeast one/two/three hybrid system |
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Hallo Leute!
Bin gerade dabei mit die Yeast one/two/three hybrid systeme näher anzuschauen. Jetzt weiß ich aber nicht ob ich das richtig verstanden habe und bitte euch um eine eventuelle Ergänzung.
Yeast One Hybrid System:
Hiermit will ich die Bindungssequenz für ein DNA-bindendes Protein, oder das für eine bestimmte Sequenz bindenden Protein herausfinden.
Dies Funktioniert indem ich das Proteine mit der aktivierenden Domäne eines Transskriptionsfaktors (zB Gal4-Aktivator) hybridisiere.
Wenn die Sequenz zum gesuchten Protein passt, dann erfolgt die Transkription und die Aktiviereung zB. eines Resistenzgens ==> Wachstum
Yeast two hybrid System
Ich suche einen Interaktionspartner (zB. Rezeptor/Ligand). Hierbei wird eine DNA-bindendende Domäne (des zB Gal4 Proteins) mit dem Rezeptor und die Aktivierende Domäne mit verschiedenen Liganden hybridisiert.
Der passende Ligand führt dann wieder zu einer Aktivierung des Transkription, da ==> Wachstum (oder sonstiges Markermerkmal)
Yeast three hybrid system
Hierbei sind mir 2 mtieinander agierende Proteine bekannt. Diese brauchen dafür aber einen Mediator. Also hab ich wieder eine DNA-bindende Domäne + dem einen Protein und eine Aktivierende Domäne + dem 2. Protein. Wenn ich dann in einem Plasmid den richtigen Mediator exprimiere ==> Wachstum
Ist das grob gesagt richtig? Gibt vielleicht Feinheiten die mir da nicht klar sind?
Danke
Beste Grüße |
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