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Enzymatische Aktivität berechnen
 
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Gast12
Gast





BeitragVerfasst am: 09. Aug 2021 10:12    Titel: Enzymatische Aktivität berechnen Antworten mit Zitat

Meine Frage:
Ich habe ein Experiment gemacht:ich habe eine 10% maltodextrin19 Lösung hergestellt und einen Tropfen lugolsche Lösung hinzugefügt. Außerdem habe ich etwas Speichel dazugegeben. Das habe ich geschüttelt und dann die Zeit gemessen bis zum vollständigen Zeitumschlag. Wie kann ich nun die enzymatische Aktivität in meiner Speichelprobe in substrat/min berechnen.

Meine Ideen:
Irgendwas geteilt durch die Zeit bis zum farbumschlag. Aber ich weiß nicht, was dem substrat entspricht.
Bio-Gast
Gast





BeitragVerfasst am: 09. Aug 2021 10:30    Titel: Enzym Antworten mit Zitat

Der Speichel enthält u.a. das Enzym Amylase,welches bestimmte Polysaccharide spaltet.
Hier ist das Substrat Maltodextrin,welches in seiner Ausgangsform mit der Lugolschen Lösung eine blaue Färbung der Lösung zeigt.
Durch den enzymatischen Abbau verschwindet die blaue(-violette) Färbung.
Für die Aktivitätsberechnung müßtest du aus dem Volumen deiner Maltodextrin-Lösung und deren Konzentration die Stoffmenge an Maltodextrin berechnen.
Der Umsatz in µmol pro Sekunde wäre die klassische Einheit Unit mit dem Symbol U.

Bio-Gast.
Gast12
Gast





BeitragVerfasst am: 10. Aug 2021 18:34    Titel: Antworten mit Zitat

Und gibt es da einen ungefähren Richtwert? Ich frage, denn bei mir dauert der Farbumschlag seit 5h an und es ist immernoch sehr violett als farblos. Dabei hatte ich eher die Vermutung, dass es sich um Sekunden handeln würde.
Bio-Gast
Gast





BeitragVerfasst am: 10. Aug 2021 18:47    Titel: Amylase Antworten mit Zitat

Der Indikator bildet mit den Maltodextrinmolekülen den farbigen(blau-violetten)Charge-Transfer-Komplex,wie bei der Iod-Stärke-Reaktion.
Erst wenn der enzymatische Abbau soweit fortgeschritten ist,daß keine längeren Helixbereiche mehr vorliegen,erfolgt der Farbumschlag zu farblos,bzw. schwach braun-gelb.
Die Dauer des Abbaus hängt,neben pH-Wert und Temperatur,von Menge Enzym und Menge Substrat ab.
Es könnte sein,daß du einfach zuviel Maltodextrin genommen hast.
Schulversuche sind von den Mengen her so abgestimmt,daß man bereits nach einigen Minuten den Farbumschlag erreicht.
Also nochmal mit einer deutlich verdünnteren Lösung Maltodextrin arbeiten, mind. Faktor 10,und dann wie vorher mit wenig LL versetzen und Speichel
(frisch) zugeben.

Bio-Gast.
Lilly_M



Anmeldungsdatum: 26.08.2021
Beiträge: 3

BeitragVerfasst am: 26. Aug 2021 10:13    Titel: Enzymatische Aktivität berechnen Antworten mit Zitat

Hallo! Wir machen in der Schule (bzw. Homeschooling) gerade ein ähnliches Experiment und ich habe mich gefragt in welcher Einheit das Substrat sein muss? Sollte man die Stoffmenge des Maltodextrin also in Gramm, Milligramm oder sogar Mol ausrechnen bevor man es durch die Zeit Teilt? Die Zeit ist bei uns in Minuten. Falls die Stoffmenge in Mol sein soll würde ich mich sehr freuen, wenn mir jemand erklären könnte, wie ich das berechne.
Vielen Dank!
Bio-Gast
Gast





BeitragVerfasst am: 26. Aug 2021 18:11    Titel: Amylase Antworten mit Zitat

Amylase spaltet die glykosidischen Bindungen von Poly-/Oligosacchariden.
Daher wird man nicht die Stoffmenge an Poly-/Oligomeren für die Substratkonzenttration nehmen,sondern besser die Anzahl Glykosidbindungen.
Diese korrelieren ungefähr mit der Stoffmenge der Monosaccharide.
Von daher kannst du hier mit der molaren Masse der Repetitionseinheit für Maltodextrin rechnen.

Bio-Gast.
lovin'bio



Anmeldungsdatum: 19.09.2021
Beiträge: 2

BeitragVerfasst am: 19. Sep 2021 14:07    Titel: Re: Enzym Antworten mit Zitat

Bio-Gast hat Folgendes geschrieben:
Der Speichel enthält u.a. das Enzym Amylase,welches bestimmte Polysaccharide spaltet.
Hier ist das Substrat Maltodextrin,welches in seiner Ausgangsform mit der Lugolschen Lösung eine blaue Färbung der Lösung zeigt.
Durch den enzymatischen Abbau verschwindet die blaue(-violette) Färbung.
Für die Aktivitätsberechnung müßtest du aus dem Volumen deiner Maltodextrin-Lösung und deren Konzentration die Stoffmenge an Maltodextrin berechnen.
Der Umsatz in µmol pro Sekunde wäre die klassische Einheit Unit mit dem Symbol U.

Bio-Gast.


->Meinst du also dass man erstmal den Anteil der Stärke am Maltodextrin 19 ausrechnen muss, bevor man dies durch die Zeit bis zum Farbumschlag teilt? Erhält man so die enzymatische Aktivität
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