DNA SEQUENZIERUNG

Gast

Hallo! Ich habe eine Frag ezur DNA-Sequenzierung. Muss man da PRIMER HINZUGEBEN? Wenn ja, woher weiß ich welche? Die DNA-Sequenzierung ist doch dazu da, dass man die DNA Sequenz herausbekommt? Werden die Primer künstlich hergestellt?

Bitte helft mir!!

Triple F · Anmeldungsdatum: 17.11.2005 Beiträge: 31

Ja, für die Sequenzierung benötigt man Primer, da dies ein PCR-basierendes Verfahren ist. Allerdings verwendet man (in den meisten Fällen) nur einen Primer - sprich den Forward oder Reverse.
Die Primersequenz kann man ableiten, da die unbekannte Sequenz in einen Klonierungsvektor kloniert wurde. Da die Schnittstelle bekannt ist, kann man daraus den Primer erstellen und bei diversen Firmen ordern. Oft verwendet auch im kleinen Labor käufliche Kits. In denen sind der Vektor, Primer usw. vorhanden

-------- :Vektor ( "||" entspricht der Restriktionsstelle, mit einem Restriktionsverdau kann man diese Sequenzstelle "öffnen")

xxxxxx : unbekannte Sequnez

1) ---------||----------- (Vektor geschlossen)

2) ---------| |----------- (Vektor geöffnet)

3) ---------|xxxxxxxxxxxxx|----------- (Vektor mit ligierter, unbekannter Sequnez)