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Tobse
Anmeldungsdatum: 05.05.2007
Beiträge: 93
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 Verfasst am: 15. März 2008 18:13 Titel: Übertragung von DNA |
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Wo setzt hier die PCR-Methode an?
1. Bevor die Restriktionsenzyme einen DNA-Abschnitt herausschneiden oder
danach?
2. Ist es auch möglich, da man ja die Nukleotidsequenz der
Restriktionsenzyme kennt, Primer synthetisch zu erstellen die nur den
Abschnitt vervielfältigen der Gesucht ist, um so nicht die gesamte DNA zu
vervielfältigen die danach mit den Restriktionsenzymen behandelt wird?
Aber gibt es da nicht Probleme mit den Sticky Ends? |
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pony
Anmeldungsdatum: 06.03.2008
Beiträge: 9
Wohnort: Rostock
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| Verfasst am: 15. März 2008 18:51 Titel: |
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also zu erstens: die PCR wird nach der Behandlung mit Restriktionsenzymen durchgeführt.
2. ist meiner Meinung nach möglich bin mir aber nicht zu 100% sicher |
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Tobse
Anmeldungsdatum: 05.05.2007
Beiträge: 93
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| Verfasst am: 15. März 2008 19:07 Titel: |
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Aber gibts da nicht Probleme mit den Sticky Ends?
Weil wenn ich die PCR start wenn die Restriktionsenzyme bereichts gewirkt haben werden diese klebrige Enden, die ja notwendig für die Übertragung der DNA sind, verschwinden.
Vor PCR (.. = gegenüber den Sticky ends)
------------..
..------------
Nach PCR
------------..
------------..
..------------
..------------
So kann ich die DNA-Abschnitte doch theoretisch gar nicht in ein Plasmid einfügen. |
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Bert
Anmeldungsdatum: 26.09.2007
Beiträge: 82
Wohnort: Niedersachsen
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| Verfasst am: 16. März 2008 00:01 Titel: Re: Übertragung von DNA |
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| Tobse hat Folgendes geschrieben: | Wo setzt hier die PCR-Methode an?
1. Bevor die Restriktionsenzyme einen DNA-Abschnitt herausschneiden oder
danach?
2. Ist es auch möglich, da man ja die Nukleotidsequenz der
Restriktionsenzyme kennt, Primer synthetisch zu erstellen die nur den
Abschnitt vervielfältigen der Gesucht ist, um so nicht die gesamte DNA zu
vervielfältigen die danach mit den Restriktionsenzymen behandelt wird?
Aber gibt es da nicht Probleme mit den Sticky Ends? |
1) In einer PCR kannst du nicht die gesamte (genomische) DNA amplifizieren, sondern nur einen bestimmten Abschnitt; dieser Abschnitt wird durch die Primer (Anfang/Ende) definiert, die Länge des Abschnitts ist durch die Fähigkeit der Polymerase auf einige kBp begrenzt (wenn es wirklich gut läuft, kannst du Amplifikate bis zu 20-30 kBp erreichen).
2) Ist die Template-DNA nur einige MBp lang (z.B. bakterielle DNA), so ist eine vorherige Restriktion nicht notwendig.
3) Für die spätere Klonierung kannst du in die Primer eine geeignete Restriktions-Erkennungsstelle einbauen. Nach der PCR schneidest du die Amplifikate mit dem entsprechenden Restriktionsenzym.
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Holzhacken ist deshalb so beliebt, weil man bei dieser Tätigkeit den Erfolg sofort sieht. [Albert Einstein] |
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Tobse
Anmeldungsdatum: 05.05.2007
Beiträge: 93
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| Verfasst am: 16. März 2008 11:43 Titel: |
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k also doch danach
Danke |
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