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q12bio
Anmeldungsdatum: 10.01.2011
Beiträge: 1
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 Verfasst am: 10. Jan 2011 08:50 Titel: Plasmid-Isolation, alkalische Lyse |
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Hallo,
ich hab ein kleines Problem. Und zwar soll ich ein kurzreferat über die Plasmid-Isolation/alkalische Lyse und Gelelektrophorese halten.
Leider steig ich bei dem Thema überhauptnicht durch.
Könnt ihr mir villt helfen ?
Ich weis bisher, dass meist E. coli- Bakterienkulturen für die alkalische Lyse hergenommen werden. Diese werden zunächst zentrifugiert ( wieso ? um an die DNA zu kommen ? )
Als nächstes folgt der alkalische Zellaufschluss ... dabei wird eine stark alkalische Lösung ( SDS ? - was ist das überhaupt für eine Lsg ?? ) hinzugefügt ( kommt wieder alles in die Zentrifuge? ), dabei öffnet sich die Plasmamembran u Zellwand, sodass DNA und Proteine denaturiert werden.
( wieso steht bei meinen notizen der Pkt. : RNA-Hydrolyse ?
Durch die zugabe einer hohen Salzkonzentration ( NaOH ?!?! ) folgt eine Abtrennung der großen bestandteile ( DNA u Plasmid ?!?! )
anschließend folgt die Plasmidreinigung ( wie ? )
u was ist die reinigungssäule ? ( u wieso abtrennung von plasmiden u puffersalzen - was sind puffersalze ? )
u mit der gereinigten plasmidlsg kann man dann die analyse ( gelelektrophorese ) durchführen - wie funktioniert diese ?
ihr merkt ... ich hab viele fragen u bilck nicht durch  |
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jörg
Anmeldungsdatum: 12.12.2010
Beiträge: 2107
Wohnort: Bückeburg
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| Verfasst am: 10. Jan 2011 12:46 Titel: Re: Plasmid-Isolation, alkalische Lyse |
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| q12bio hat Folgendes geschrieben: |
Diese werden zunächst zentrifugiert ( wieso ? um an die DNA zu kommen ? ) |
Natürlich zielen alle Schritte darauf ab, letztendlich an die DNA zu kommen, doch wäre dies allein durch Zentrifugation möglich, wieso dann all die anderen Schritte?
Überlege einmal, was das allgemeine Ziel einer Zentrifugation ist??
| q12bio hat Folgendes geschrieben: | | SDS ? - was ist das überhaupt für eine Lsg |
SDS heißt: Sodium dodecyl phosphat und ist ein Ester der Schwefelsäure, das als Detergenz (dient der "Vermischung" von lipophilen und hydrophilen Stoffen= Emulsion, wird auch in Shampoos und anderen Reinigern verwendet) eingesetzt wird. Deutsches Synonym: Natriumlaurylsulfat.
| q12bio hat Folgendes geschrieben: | | Als nächstes folgt der alkalische Zellaufschluss ... dabei wird eine stark alkalische Lösung hinzugefügt ( kommt wieder alles in die Zentrifuge? ), dabei öffnet sich die Plasmamembran u Zellwand, sodass DNA und Proteine denaturiert werden. |
Überlege nocheinmal, ob wirklich DNA und Proteine denaturiert werden. Welche DNA kann man denn durch Denaturierung von Proteinen loswerden?
| q12bio hat Folgendes geschrieben: | | wieso steht bei meinen notizen der Pkt. : RNA-Hydrolyse ? |
Darauf könntest du selbst kommen, wenn du über die Gemeinsamkeiten von DNA und RNA nachdenkst....
| q12bio hat Folgendes geschrieben: | Durch die zugabe einer hohen Salzkonzentration ( NaOH ?!?! ) folgt eine Abtrennung der großen bestandteile ( DNA u Plasmid ?!?! )
anschließend folgt die Plasmidreinigung ( wie ? )
u was ist die reinigungssäule ? ( u wieso abtrennung von plasmiden u puffersalzen - was sind puffersalze ? )
u mit der gereinigten plasmidlsg kann man dann die analyse ( gelelektrophorese ) durchführen - wie funktioniert diese ?
ihr merkt ... ich hab viele fragen u bilck nicht durch |
Den Eindruck teile ich, doch versuche, etwas Struktur in die Abfolge zu bekommen. Laß uns erst einmal überlegen, woraus so eine Zelle besteht, was wir haben wollen und dann das Vorgehen systematisch nachzuvollziehen. Also die Zentrifugatin zu Beginn: Was erreichen wir damit? (Wie ist denn die Beschaffenheit des Mediums, in dem die Zellen sich befinden? Und wie ist demgegenüber die Beschaffenheit der Zellen selbst?)
Ach so, handelt es sich dabei um ein Schulreferat? Gegebenenfalls wäre es günstiger, sich ersteinmal die Plasmid- Präzipitation mit Phenol und Chloroform anzuschauen, um nachzuvollziehen, was eigentlich passiert.
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RNA?- just another nucleic acid? |
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