Plasmidisolation und Zellaufschluss

Der Junge mit Hut · Gast

Hi,

Ich hab grad ein Problem: Ich schreib gerade einen Bericht für die Schule in dem ich erklären soll, was die oben genannten Sachen sind.
Das wäre nicht das Problem, allerdings ist mir entfallen wie man das macht. Wisst ihr da zuföllig weiter ?

Ach ja, etwas genauer:

1) Plasmidisolation mit anschließendem Testverdau (->?)
2) Zellaufschluss mit Proteintotalextraktgewinnung

MfG und Danke !

Labormaus · Anmeldungsdatum: 28.10.2010 Beiträge: 17 Wohnort: nahe HD

ich weis das die antwort etwas spät kommt und dir warscheinlich nicht mehr nützt aber vileicht nützt sie noch jemand anders.

1.) Plasmide sind Ringförmige DNA/RNA-Moleküle die man einfach über kleine säulchen isolieren kann. Dazu muß man zuerst die bakterienzellen zerstören z.b. mit einem Sonifeier, anschließendes Zentrifugieren so das zelltrümer im pellet sin. der überstand wird auf die säule gegeben an den meist glaspartikeln bleiben die plasmide hängen, mit ein par waschschriten reinigt man das ganze und anschließend wird über die salzkonz. eluiert.
Testverdau: ein verdau bedeutet man läst restriktionsenzyme das Plasmid schneiden und da es ein testverdau ist schaut man sich das später an indem man ein gelbild macht. Bei genaueren Infos bitte nochmal nachfragen.

2.) Zellaufschluß wie oben zb durch den sonifeier bei größeren zellen die etwas robuster sind kann man auch ein daunzer benutzen. Wieder zentrifugieren das nur noch proteine im überstand sind. Ab pippetieren und vertig.