Gelelektrophorese

^^RikeKrisse^^ · Gast

Haaallo!!

Kann uns jemand erklären, wie genau Gelelektrophorese funktioniert?? Wir sind 2 sehr eifrig lernende Bioschülerinnen *g*, die das ganz ganz schnell wissen müssen!! Achso ja und es sollte, wenn möglich, nicht zu kompliziert erklärt werden (wenns geht). Würden uns sehr freuen, wenn schon bald jemand ne antwort schreiben würde!Danke!! smile

Nadine · Anmeldungsdatum: 23.03.2005 Beiträge: 75

Hallo!

Die Gelelektrophorese ist ein Elektrophorese-Verfahren, bei dem ein Gel als Trägermedium benutzt wird. Am häufigsten werden durch Gelelektrophorese Gemische von Proteinen, DNA oder RNA aufgetrennt. Wichtige Trägermedien sind Agarosegel und Polyacrylamidgel.

Elektrophorese mit Agarosegel
Agarosegel verwendet man zur Auftrennung von DNA und RNA. Die Trennung wird durch die im Gel vorhanden Poren erreicht, die wie ein Sieb wirken und deren Größe die Wanderungsgeschwindigkeit der DNA bestimmen. Die Porengröße des Gels wird durch die Agarosekonzentration festgelegt.
Da die DNA negativ geladen ist, wandert sie stets zur Anode. Die Wanderungsgschwindigkeit ist von der Länge und der Konformation der DNA abhängig. Kurze DNA-Fragmente wandern schneller als lange und ringförmige DNA schneller als lineare. Die kürzesten Stränge wandern im Gel am weitesten in Richtung Anode. Als Referenz lässt man einen Marker aus DNA-Molekülen mitlaufen, deren Länge man kennt.

DNA/RNA Fragmente sind nativ nicht sichtbar und werden deshalb mit Ethidiumbromid oder Megafluor angefärbt. Die Färbung erzeugt die typischen sichtbaren "Banden" im Trägermedium.

Noctu

bei Proteinen nimmt man entsprechend ein Acrylamid-Gel, die Banden macht man mit einem sog. Silverstain oder durch Coomassie-Färbung sichtbar. Interessant ist evt. die Isoelektrische Fokusierung IEF zur Charakterisierung von Eiweissen, die laufen im Gel durch einen pH-Gradienten, bei einem gewissen pH ist ein Protein elektrisch neutral und bleibt stehen, wandert im Elektr. Feld nicht weiter.

Gast

@Nadine: Nur der Vollständigkeit halber eine Bemerkung. Ringförmige DNA läuft nur dann schneller im Gel als die entsprechende lineare DNA, wenn sie als superhelikales Molekül vorliegt (wie z.B. in Bakterien), vollkommen entspannte DNA („open circle“) läuft im Gel langsamer. Aber das nur als Randbemerkung.
"Gast"