Zellkultur

NIH-3T3 · Anmeldungsdatum: 17.08.2016 Beiträge: 1 Wohnort: Karlsruhe

Meine Frage:
Hallo zusammen,

wir kultivieren NIH-3T3 Zellen in unserem Labor. Seit einigen Wochen haben wir jedoch einen Wachstumsrückgang mit Zellen, die so aussehen, als seien sie apoptotisch. Ich habe im Internet recherchiert. Die Beschreibung von apoptotischen Zellen passt genau zu dem, was wir in unseren Kulturen beobachten: die Zellen sind kugelig und haben Bläschen ringsherum. Ca. 30 % der Zellen zeigen diese Morphologie. Meine Frage ist nun: Was kann der Grund sein dafür, dass die Zellen in die Apoptose gehen? Wer hat dieses Phänomen schon bei der Kultivierung immortalisierter Zellen beobachtet? Und was kann man dagegen tun? Hier noch weitere Infos: Wir kultivieren in DMEM mit high Glucose, 10 % FBS und 1 % Pen/Strep. Die Überstände sind negativ auf Mycoplasmen (Test mit ELISA), und visuell ist keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen sichtbar. Alle Zellkulturreagenzien die eingesetzt werden haben die selbe Charge wie vor einem halben Jahr. Ich hoffe, dass jemand eine Idee hat und Tipps geben kann.

VG,
SP

Meine Ideen:
Ehrlich gesagt habe ich überhaupt keine Idee, wieso die Zellen sich so verhalten.

Ethanolic · Anmeldungsdatum: 29.04.2014 Beiträge: 44

Hi,

was ich zuerst machen würde ist eine neue Kultur ansetzen, mit Zellen die vor dem auftreten des Phänomens konserviert wurden. Dann vergleichen.

Das Beschriebene klingt irgendwie nach Infektion....(Viren, intrazelluläre Bakterien) durch das splitten verringert Ihr dann die menge an infektiösem Agenz im Überstand und es gibt keine komplette Infektion.

Andererseits, und ich halte das für viel Wahrscheinlicher, können die Zellen auch einfach Ihr Verfallsdatum überschritten haben (wir kultivierten NIH immer mit NCS statt FCS, weil diese so schnell gewachsen sind, dass sie schlichtweg Ihre Chromosomenzahl verändern und dann abschmieren)

Die selben Medien-etc. wurden verwendet, eventuell ist es auch eine gute Idee eine andere Charge zu verwenden, die eben noch nicht auf den Zellen probiert wurde (weil es kann ja wirklich alles vor allem mit dem verdammten Serum passieren)

Sag bescheid, wenn Ihrs lösen könnt, würde mich interessieren.

LG