Isolierung von Chloroplasten

KJay · Anmeldungsdatum: 20.07.2006 Beiträge: 23

Bei der Isolierung von Chloroplasten haben wir EDTA und MgCl2 dazu gegeben. Ich habe gelesen, EDTA ist ein Ionenfänger und komplexbildner, der störende Ionen aus der Lösung raus fischen soll. Welche Ionen sind hier gemeint und warum stören sie? MgCl2 soll die Aktivität von Organellen aufrecht erhalten und die Organellmembran stabilisieren. Stimmt das? Und wie macht das MgCl2 das?

In den Skripten u.s.w. steht immer nur, was man alles dazu geben soll, aber selten, was für eine Funktion die ganzen Sachen haben... Vielleicht weiß es ja trotzdem wer. smile

thx.

Noctu

kannst Du evt. kurz die Lösungen aufschlüsseln, d.h. was und in welchen Molaritäten sind drin. Mg und EDTA zusammen sind sinnlos ( es sei denn Du wolltest Schwermetalle maskieren ) weil das EDTA vorwiegend Metall2+ Ionen bindet.

KJay · Anmeldungsdatum: 20.07.2006 Beiträge: 23

Ja, könnte ich, also wir haben zunächst eine Lösung B verwendet, haben dann gemixt und filtriert und anschließend das gleiche Volumen an dest. Wasser dazugetan wie das Filtratvolumen, um die Chloroplasten aufzubrechen.
Lösung B: 0,05 M Tris, pH 7,6 mit 5 mM MgCl2, 2 mM EDTA und 0,33 M Saccharose.

Das ist seltsam, da tatsächlich EDTA und Mg2+ zusammen drin sind, aber vielleicht ergibt es doch einen Sinn: Das Mg2+ ist weg und Cl- und H+ von der EDTA können zusammen mit Tris puffern. Ergibt das einen Sinn? Warum tut man dann nicht gleich HCl dazu? Oder fängt die EDTA noch andere Schwermetallionen weg, die die Enzymaktivität beeinträchtigen würden? Aber wo sollten die herkommen?

Noctu

Die Pufferwirkung in der Lösung kommt einzig durch das TRIS, sonst muss ich jetzt leider passen warum die Lösung gerade so zusammengesetzt ist.