Antikörper

xXTJSXx · Gast

Hi ich brauche dringend Hilfe zu diesen Fragen da unten, ich hab ein paar Probleme damit. Ich kan sie nicht lösen da ich sie nicht verstehe. Wäre nett wenn mir jemand helfen könnte. Danke

Fall 1 (4P)
Sie wollen eine Doppelmarkierung durchführen und haben daher gegen die
2 gesuchten Strukturen (z.B. ein Molekül im Kern, ein Molekül in der Zellmembran) je einen spezifischen Antikörper (IgG) aus zwei Arten eingesetzt (K = Kaninchen und M = Maus).

Für eine gute Detektion wählen Sie welche sekundären Antikörper aus?
für den primären Antikörper aus K (Kaninchen): ...............................................
für den primären Antikörper aus M (Maus): .....................................................

Fall 2 (3P)
Sie wollen mittels Durchflußcytometrie B-Zellen der Maus nachweisen, die gerade membranständiges IgM exprimieren. Sie wollen die Zellen dabei intakt lassen!.

Welchen Antikörper setzen Sie ein?.....................................................................

Fall 3 (3P)
Sie haben polyklonales Kaninchenserum zur Markierung (‚= prim. AK) eingesetzt und wollen außerdem eine möglichst starke Markierung (= gutes Signal durch Auswahl eines geeigneten sek. AKs) der gesuchten Struktur erreichen.

Welchen sekundären Antikörper setzen Sie ein? ........................................................
Warum bekommen Sie diesen Effekt hin?....................................................................

Lösung ist gegeben:

Antikörper aus, die Ihnen ein erfolgreiches Ergebnis ermöglichen.

1 - Esel anti-Maus Ig (Fab‘)2 (FITC)
2 - Schwein anti-Kaninchen IgG (Fc γ-Kette) (ALP)
3 - Ziege anti-Maus IgM (Fc

Noctu

das ist garnicht so schwer zu verstehen :

vllt. zum Verständnis was es mit den sekundären AK auf sich hat:
Die sek.AK richten sich spezifisch gegen die AK einer Spezies. Die sek.AK werden gekoppelt mit einem Farbstoff ( FITC = Fluoreszin ) oder einem anderen Ding mit dem sie ihre Anwesenheit verraten. Das "Ding" kann ein Goldpartikel, ein Enzym ( ALP = Alkalische Phosphatase ) sein.
Mann nenn das, der AK ist xxx-gelabelt.

Sinn der ganzen Sache ist dass man mit einem sek.AK eine Vielfalt anderer AK erkennen und detektieren kann, nämlich die primären AK, die Du z.B. aus Kaninchen gewinnen kannst - ein Tier mit dem sich schnell und einfach große Mengen AK entwickeln lassen. Der sek.AK wäre dann z.B. ein Ziege-anti-Kaninchen AK. Der Ziege-AK erkennt nun alle Kaninchen AK und zwar spezifisch , egal was der Kaninchen AK erkennt.

Mit dem Wissen sind die Aufgaben jetzt recht einfach:

Bei1) hast Du als Primäre AK einen aus der Maus und einen aus Kaninchen. Entsprechend brauchst Du jetzt als sek.AK einen anti-Maus und einen anti-Kanninchen - welche aus Deiner Liste würdest Du dann nehmen ?
Man kann mit mehreren AK gleichzeitig arbeiten, durch ihre Spezifität stören die sich gegenseitig nicht.

Bei2) gleiches Spiel , Du hast Maus Lymphozyten die Maus IgM tragen ( IgM ist eine besondere Form von AK ) welchen sek.AK brauchst Du ?
Da die Verwendung in einem Flow-Cytometer stattfindet muss der mit einem (Fluoreszenz)Farbstoff gelabelt sein ...

Da es sich um B-Zellen der Maus handelt sollte/muss man noch mit einem Pan-B-Marker gegenfärben also ein AK der alle B-Zellen erkennt, das wäre ein anti-Maus CD19. Aus dem Pool sucht und erkennt man dann die B-Zellen die die IgM tragen, detektiert von dem AK den Du wählen musst.
Vllt. geht das über die Zielerwartung der Aufgabe hinaus ....

Bei3) Wieder gleiches Spiel : was ist der primäreAK , welchen sek.AK muss man wählen ?
Bei polyklonal ist zu bemerken dass Du in Deinem Serum hast mit einem AK-Gemisch dass viele Strukturen eines Epitopes erkennt, entsprechend stark beladen ist Dein Epitop und entsprechend viele sek.AK binden dann, entsprechend stark ist dann Dein Signal.

franzb · Anmeldungsdatum: 13.10.2009 Beiträge: 9

Nix zu ergänzen! Smile

Für weitere Infos zur praktischen Umsetzung schau doch mal hier:

http://de.wikipedia.org/wiki/Western_Blot Lehrer

LauriM · Anmeldungsdatum: 29.08.2011 Beiträge: 2

Nicht verzagen Wikipedia zum Thema Antikörper fragen Lehrer

http://de.wikipedia.org/wiki/Antik%C3%B6rper

VG