Klonen mit Hilfe von Hefe

Venter · Gast

Meine Frage:
Hallo alle zusammen,

es geht um Craig Venters große Errungenschaft als er letztes Jahr das erste künstliche Bakterium erzeugen konnte.

Ich verstehe da einen Schritt nicht:

Hefezellen wurden mit fragmentierter DNA von M. mycoides (ungefähr 100 kb groß) "cotransformed".

Leute, heißt das also, dass die HefeDNA mit den Teilchen der mycoides DNA eine Verbindung eingeht?

Und dann noch eine Frage...wie muss ich mir bitte das Szenario vorstellen, dass 100 kb DNA in Hefe geklont wird?

Wird hier bei jeder Duplikation von Hefe DNA auch gleich die 100 kb mit dupliziert?

Ich dachte immer, dass Venter Hefe dafür brauchte, dass er aus den kleinen synthetisch hergestellten DNA-Stücken immer größere erhält...wie auch immer die Hefe das macht??

Danke schonmal im Voraus!

...nur gleich dazu: Ich finde, dass Venter hier nichts weltbewegendes geschaffen hat, denn er hat ja nur die Gentechnik bis zum Ende ausgereizt...bis auf die Wasserzeichen war ja an mycoides alles gleich.

Meine Ideen:
siehe bitte auch oben....

PaGe · Moderator Anmeldungsdatum: 19.03.2007 Beiträge: 3549 Wohnort: Hannover

Hefen können wie Bakterien Plasmide enthalten. Also zusätzlich zur "normalen" DNA. Diese Plasmide werden etwas häufiger vervielfältigt als die "normale" DNA, die Prozesse sind aber nicht synchronisiert. Es kann also vorkommen, dass nach einer Zellteilung eine Hefezelle ohn Plasmid entsteht.

Venter · Gast

Also kann weder Hefe noch E.coli die Teilchen zusammen setzen, sondern nur klonen?

jörg · Anmeldungsdatum: 12.12.2010 Beiträge: 2107 Wohnort: Bückeburg

Ich glaube, hier ist es nötig, ersteinmal einige Grundlagen zu klären, bevor Verständnis erzeugt werden kann....
Weißt du, was "nur" Klonen eigentlich bedeutet? ...Und kennst du den Unterschied zum "Klonieren"?

Mache dir einmal klar, was es bedeutet, einen vollständigen Organismus synthetisch "herzustellen".....
Dabei ist der Weg, den Venter gewählt hat, ziemlich originell:
Er hat das Genom von M. mycoides am Cumputer reproduziert und dann in vitro synthetisiert, in vielen, kleinen "Stücken". Die Rekombinationssysteme der Hefe wurden nun genutzt, um das Genom "zusammenzubauen". Zur Wiedererkennung hat er Sequenzen eingefügt, die nur von seltenen Restriktionsendonukleasen erkannt werden (= "Wasserzeichen"- Sequenzen). Durch homologe Rekombination entstanden so bis zu 10kb- Fragmente, die er in E. coli transformiert hat. Diese haben die Plasmide vervielfältigt. Alle diese 10kb- Fragmente wurden nun wieder in Hefe transformiert und dort erneut rekombiniert, so daß jetzt bis zu 100kb- Fragmente entstanden. Mit diesen Fragmenten dann das gleiche nochmal:Transformation und homologe Rekombination in Hefe. Dann hat er nach dem vollständigen M. mycoides- Genom gesucht, das er mit Hilfe seiner Wasserzeichen wiedererkennen konnte, indem es durch Restriktionsverdau in Segmente spezifischer Größe zerlegt wurde. Nun hat er das Genom in M. capriolum transplantiert, also das Originalgenom durch das synthetische ersetzt. Damit wurde M. capriolum quasi zu M. mycoides.

... Und Kotransformation bedeutet nicht, daß "Verbindungen zwischen der Hefe- und der Mycoplasmen- DNA eingegangen wurden"....
Hier bedeutet Kotransformation, daß Venter zusätzlich zu den Plasmiden noch DNA transformiert hat, die die Replikation der Vektoren ermöglicht.