isolierte Mitochondrien, Experimente mit label

vogelstrauss · Anmeldungsdatum: 22.04.2009 Beiträge: 7

Hallo,
ich hoffe, meine Frage ist nicht zu speziell, aber ich versuche es mal:

Ich versuche gerade eine Studie zu verstehen, in der es um die quantifizierung des Energietransportes in mitochondrien mit hilfe von sogenannten 'labeling experimenten' geht.

Dazu werden Mitochondrien aus Herzmuskelzellen isoliert, diese werden dann in ein Medium getan, das ATP, ADP inorganisches Phosphat enthaelt.
Um die ATP produktion des Mitochondriums zu starten, wird Kreatin in hohen Mengen hinzugegeben, und 32P inorganisches Phosphat (also radioaktiv markiertes Phosphat). Nun will man herausfinden, wo das markierte Phosphat gelandet ist, d. h. in welche Metabolite.

Nun werden nach ca 10 Sekunden die spezifischen Aktivitaeten von folgenden Metaboliten gemessen:
Pi (inorganisches Phosphat)
ATP
PCr (Phosphokreatin)
ADP
In allen der oben genannten Metaboliten findet man nun markiertes Phosphat.

Hier ist der Punkt, den ich nicht verstehe: Warum findet man Phosphat in ADP?
In ATP, ist klar, weil Pi + ADP <-> ATP (hier ist das gamma-phosphat markiert, nehme ich an...)
In PCr auch, da Cr + ATP <-> PCr + ADP
Pi, logisch, das war ja von Anfang an gelabelt.
Aber wie kann das markierte Phosphat ins ADP kommen? Durch adenylat-Kinase nicht, glaub ich, die Reaktion ist ADP + ADP <-> Pi + ATP.

Da an isolierten Mitochondrien experimentiert wurde, glaube ich auch nicht, dass ATP verbraucht wird...

Hier ist der Link zu dem Paper: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/7142217

Ich bin fuer jeden Rat dankbar!!!

Gruesse,

Vogelstrauss

jörg · Anmeldungsdatum: 12.12.2010 Beiträge: 2107 Wohnort: Bückeburg

Ich kann nur vermuten:
Bei stark endergonischen Prozessen wird ATP auch in AMP + PP gespalten.
Das AMP wird dann wieder mit Dihydrogenphosphat zu ADP kondensiert.

Das wäre eine mögliche Erklärung.

vogelstrauss · Anmeldungsdatum: 22.04.2009 Beiträge: 7

Hallo Joerg,

vielen Dank fuer die Antwort, das waere eine Moeglichkeit. Ausserdem hab ich die Rueckwaertsreaktion der Adenylat-Kinase vergessen: Wenn markiertes ATP (ATP*) mit AMP reagiert:

ATP* + AMP <-> ADP* + ADP

Vielen Dank,

ich denk ich hab jetzt eine gute Erklaerung, warum gelabeltes ADP gemessen wurde!

Gruesse,

vogelstrauss