Drosophila Genetik

BlondieMS · Gast

Meine Frage:
An RNAi screen in Drosophila glia using panglial driver repo has identified the gene gummbärchen (gib) with pupal lethal phenotype. gib encodes for an (imaginary) sugar transporter locatetd on the X chromosom of Drosophila with three different transcript isoforms giving rise to an identical protein.

you generated an isolatetd a CRISPR mediatetd null mutant for gib which turns out to be embryonic lethal.

1. Meanwhile away your boss finds out that there is a not published listed collection of EMS induced gib alleles with lethalities ranging from embryonic lethal to viable with s shortened lifespan in a different lab.
a) what set of genetic experiments do you need to do to confirm that all these, including your CRISPR induced ones are gib alleles and how can you use these flies to find out more about gib?
b) would you need any addiotional fly stocks for this?
c) How can you show that gib is necessary for developmant and/or sufficient fpr survival?

2. As an alterntive and more novel approach, you decide to construct a set of transgenes Drosophila that would allow conditional CRISPR knoch out of gib in any desired tissue at any given times. Specify all necessary modules, element, way of construction ans transgenesis and give an exmaple of the genetics necessary to get all elements together in subperineuinal glia and perineurial glia of the CNS in stage L3

Das ist der Teil der Hausaufgaben bei dem ich keinen Ansatz einer Lösung finde...

Danke für eure Hilfe! :)

Meine Ideen:
1. Ja ich brauch sicherlich weitere Fliegenstöcke. Mindestens Wildtyp zur Kontrolle. Und ich werde bestimmt auch einige Treiberlinien benötigen.
2. Crispr funktioniert doch nur mit dem Enzym? Kann ich nicht das Enzym manipulieren um ein konditionales CRISPR zu erhalten?

Es gibt noch mehr text dazu, aber ich denke der spielt für die Beantwortung der einzelnen Abschnitte keine Rolle

jörg · Anmeldungsdatum: 12.12.2010 Beiträge: 2107 Wohnort: Bückeburg

Ich habe von Drosophila-Genetik nicht ganz so viel Ahnung, das scheint jedoch in einigen Punkten egal zu sein.
Ferner (oder deswegen?) kann ich mit einigen Abkürzungen nichts anfangen, wie z.B. EMS und fpr, weswegen ich zu Aufgabe 1 erstmal wenig sagen kann.

Zu Aufgabe 2.) allerdings solltest du nicht schauen, ob die Cas gewebespezifisch arbeiten kann, sondern ob du das CRISPR-Cas-System gezielt in bestimmte Gewebe bekommen kannst....

BlondieMS · Gast

oh als fpr ist nur ein Tippfehler und heißt eigentlich "for" und EMS ist einfach eine Chemikalie die sich da wohl zur Mutagenese schon etabliert hat. Zufällige Mutagenese

Cas 9 gewebsspezifisch zu exprimieren ist natürlich eine Idee. Ich hätte bisher versucht die NGG Erkennungssequenzen irgendwie gewebsspezifisch einzubringen und Cas9 unter einen Gal80/Gal4 System zu bringen, damit ich es über die Temperatur erst anschalte, wenn die Larven im L3 Stadium sind. smile