Northernblot frage^^

mastarula · Anmeldungsdatum: 11.11.2006 Beiträge: 4

Also wie Northernplot im groben funkt ist mir schon klar, --> man trennt die Rna auf, macht nen blot und hybridisiet ( labeln), aber wozu braucht man ne "normalisierung" (Siehe letzten Satz im Orginaltext bzw. auf dem pic die letzte Zeile)

http://i15.tinypic.com/2qak74n.jpg

"Original Text"
RNA gel blot analysis was carried out as described previously
by loading 3 mg total cellular RNA per lane (18). The
templates for probing the tetC genes were NdeI±XbaI coding
region fragments. The template for probing the tobacco
cytoplasmic 25S rRNA was a PCR fragment ampliÆed from
total tobacco cellular DNA with primers 5¢-TCACCTGCCGAATCAACTAGC-
3¢ and 5¢-GACTTCCCTTGCCTACATTG-
3¢. Probes were prepared by random-primed
32P-labeling (see above). [COLOR="Red"]RNA hybridization signals were
quantiÆed using a Molecular Dynamics PhosphorImager and
normalized to the 25S rRNA signal.[/COLOR]

THx MAstar

mastarula · Anmeldungsdatum: 11.11.2006 Beiträge: 4

Die Antwort hab ich jetzt schon gefunden:

also man hybridisiert mit rRNA weil die Menge so gut wie immer konstant ist (also wenn man 4x die gleiche Menge von RNA nimmt (verschiedene Proben) dann sollte wenn man die RNA Bande gleich stark sein) --> damit zeigt man an, dass die gleiche Probenmenge verwendet wurde (also nicht gepfuscht)

MFG MAstarr