Unterschied klonieren und amplifizieren; Genomsequenzierung

Leonieeee · Gast

Hallo,
ich verstehe nicht ganz den Unterschied zwischen "klonieren" und "amplifizieren". Beides meint doch eigentlich die Vervielfältigung oder? Nur dass klonieren noch zusätzlich die identische Vervielfältigung meint oder?
Denn es geht darum wie man unbekannte Genome sequenzieren kann, und da gibt es ja die YACs. Ich habe gelernt: "In Bakterien wird die DNA kloniert und anschließend in Hefe amplifiziert -> shuttle vektoren"
Ich verstehe das aber leider immer noch nicht ganz, wär super wenn mir jemand weiter helfen könnte!
LG:)

jörg · Anmeldungsdatum: 12.12.2010 Beiträge: 2107 Wohnort: Bückeburg

Amplifiziert wird eine bestimmte Sequenz, meist ein bestimmtes Gen, welches dann in einen bestimmten Vektor kloniert wird.
Klonieren bezeichnet also einen eher heterologen Vorgang, in dem z.B. ein Gen in ein Plasmid eingebracht wird, um dann das ganze Plasmid von Bakterien vervielfältigen zu lassen. Beim Klonieren handelt es sich stets um identische Sequenzen, richtig. Aber auch bei der Amplifikation (z.b. mittels PCR) können identische Sequenzen vervielfältigt werden.
In dem Satz, den du genannt hat, bedeutet Klonieren das Einbringen und vervielfältigen der Yeast-artificial-chromosomes in Bakterien. Jedes Bakterium enthält da einen bestimmten YAC, der verfielfältigt wird. Das Bakterium kann dabei mit den entsprechenden Sequenen wenig anfangen, sie werden also nicht translatiert oder transkribiert. Anders in der Hefe, nachdem diese mit den ensprechenden YACs transformiert wurde. Hier wird das Genom amplifiziert und es kann auch zu Rekombinationen kommen.