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Nachricht |
Celia
Gast
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 Verfasst am: 11. Nov 2011 10:52 Titel: E. coli Ampicillinresistenz |
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Meine Frage:
Hallo,
neulich haben wir E. coli transformiert. Es ging darum, dass sie Ampicillinresistent werden und außerdem um die blau-weiß-Selektion.
Soweit hat auch alles ganz gut geklappt, nur haben wir ein kleines Problem beim Auswerten der Ergebnisse:
In den Ansätzen, in denen wir Pflanzen-DNA + Plasmidvektor auf einen Ampicillin-Agar gebracht haben, haben wir nur weiße Bakterienkolonien beobachtet. In den Ansätzen ohne DNA, nur mit dem pUC-Plasmid haben wir nur blaue Kolonien beobachtet. Das Problem ist jetzt aber, dass auf der Agarplatte, die gar kein Ampicillin enthalten war, auf die auch DNA+Plasmidvektor gegeben wurde gar nichts wuchs. Liegt es an einem Fehler den wir gemacht haben müssen? Weil eigentlich müssten dort doch blaue und weiße wachsen, da es egal ist, ob sie resistent sind, oder nicht, also ob sie mit der DNA transformiert sind...
Ich hoffe meine Frage ist verständlich geworden und freue mich über Antworten :-)
lg
Meine Ideen:
--- siehe oben |
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jörg
Anmeldungsdatum: 12.12.2010
Beiträge: 2107
Wohnort: Bückeburg
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| Verfasst am: 11. Nov 2011 14:44 Titel: Re: E. coli Ampicillinresistenz |
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| Celia hat Folgendes geschrieben: |
In den Ansätzen, in denen wir Pflanzen-DNA + Plasmidvektor auf einen Ampicillin-Agar gebracht haben, haben wir nur weiße Bakterienkolonien beobachtet. In den Ansätzen ohne DNA, nur mit dem pUC-Plasmid haben wir nur blaue Kolonien beobachtet.[...]Weil eigentlich müssten dort doch blaue und weiße wachsen, da es egal ist, ob sie resistent sind, oder nicht, also ob sie mit der DNA transformiert sind... |
Erkläre doch einmal, warum die einen blau und die anderen weiss sind. Nutze dazu die Erkenntnisse über das Lac-Operon.
Mit der Resistenz hat das nämlich wenig zu tun, selbst, wenn ihr ein Resistenzgen kloniert hättet, denn der pUC19 Vektor verfügt bereits über eine Ampicillin-Resistenz.
| Celia hat Folgendes geschrieben: | | Weil eigentlich müssten dort doch blaue und weiße wachsen, da es egal ist, ob sie resistent sind, oder nicht, also ob sie mit der DNA transformiert sind... |
Was bitte hat die Insertion mit der Resistenz zu tun?
Dass dort allerdings Kolonien wachsen sollten, ist richtig und das ausbleiben erklärt sich mir spontan auch nicht. Aber wenn du erstmal auf die oben genannten Punkte eingehst (v.a. Erklärung des blau-weiss-screenings) und dazu beschreibst, was konkret ihr gemacht habt, können wir versuchen, eine Fehleranalyse vorzunehmen.
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