GFS genetischer Fingerabdruck: Wieso zwei restriktionsenz.

PeterFreudig · Gast

Hallo,

ich muss eine meiner Bio-Gfs über das Praktikum zum genetischen Fingerabdruck halten. Besonders soll ich hier nochmal darauf eingehen wieso man bestimmte Schritte macht.

1) Mir ist nicht ganz klar wieso man gerade zwei restriktionsendonucleasen benötigt ( in meinem Fall HindIII und BamHI)

2) Wieso wird zudem noch ein Puffer B dazugegeben. Welche "Aufgabe" hat dieser genau?

Ich hoffe meine Fragen sind verständlich :-)

Vielen Dank im Vorraus

Peter Freudig

Firelion · Anmeldungsdatum: 27.08.2009 Beiträge: 1878

Hi,

generell braucht man einen Puffer, um die richtigen Reaktionsbedingungen wie z.B. Elektrolyte oder pH einzustellen.

Was genau habt ihr denn im Praktikum gemacht?

LG Firelion

PeterFreudig · Gast

wir werden einen genetischen Fingerabdruck machen.. bzw. das Verfahren des genetischen Fingerabdrucks.

Das ganze wird so aufgebaut dass es eine Tatort-DNA gibt und 3 vergleichs-DNA (natürlich alle von Bakterien) gibt.

letztlich soll man dann rausbekommen wer der "Täter" ist

lg

PeterFreudig · Gast

Kann es sein, dass der Puffer benötigt wird, da die DNA sonst in Verbindung mit Wasser eine Säurewirkung entwickeln würde (durch Protonenabgabe) und die Restriktionsendonucleasen nicht mehr wirken könnten?

Und die zwei Restriktionsenzyme benötigt werden, damit der Test aussagekräftiger bzw. genauer wird??

grübelnd

lg

Peter

PaGe · Moderator Anmeldungsdatum: 19.03.2007 Beiträge: 3549 Wohnort: Hannover

zum Puffer:
Firelion hat dir doch schon die Antwort geschrieben. Die Reaktionsbedingungen müssen stimmen. Mit der Säurewirkung der DNA hat das nichts zu tun. Enzyme brauchen zum Beispiel bestimmte Bedingungen, damit sie die richtige Konformation haben, um überhaupt arbeiten zu können. Daher nimmt man auch für die Enzyme häufig unterschiedliche Puffer.

Was passiert denn mit dem Erbmaterial, wenn man ein Restriktionsenzym hinzugibt? Was passiert, wenn man zwei Restriktionsenzyme hinzugibt?

PeterFreudig · Gast

Nunja, die DNA werden nicht nur die AGCT VNTR-Loci herausgeschnitten, sondern eben auch noch die GATC... oder nicht?

Das hätte ja dann zur Folge dass man quasi "zwei Faktoren" untersucht und das ganze somit genauer wird.

PaGe · Moderator Anmeldungsdatum: 19.03.2007 Beiträge: 3549 Wohnort: Hannover

Bist du sicher, dass ihr wirklich die Loki untersucht. Ich weiß nicht mal, ob Baktis die auch haben. Ich könnte mir eher vorstellen, dass ihr Plasmide von Baktis zerschneidet.

Ansonsten hast du natürlich recht. 2 Orte zu untersuchen, macht es genauer. Problematisch wird es nur, wenn es durch den doppelten Verdau zu Überlagerungen kommt, die das Ergebnis wieder verkompliziert.

PeterFreudig · Gast

Entschuldigung, war ein Fehler von mir Augenrollen

habe vor lauter Bäumen den Wald nicht mehr gesehen. Wir machen nur die ganz normale Restriktionsfragmentlängenpolymorphismusmethode...
Ich habe da so manches durcheinander gebracht.

Somit hat sich das also erledigt :-)

Vielen Dank für eure Hilfe

Gruß

Peter