optische dichte

Max der Esel · Gast

Meine Frage:
Hallo,
hoffentlich könnt ihr mir helfen.
Es geht um die optische Dichte.
Wenn ich in 1mL eine OD von 0,5 habe, welche OD habe ich dann, wenn ich nur 0,2mL im Photometer messe?!?!?!
(Ich weiß, eine dumme Frage, aber ich hoffe auf eure Hilfe!)
Lg

Meine Ideen:
.

Hedera · Anmeldungsdatum: 08.03.2011 Beiträge: 657

Man sagt ja immer, dass es keine dummen Fragen gibt und das stimmt auch.
Aber gewisse Fragen zeigen, dass man nicht verstanden hat, worum es geht und anstatt solche Fragen dann zu beantworten, sollte man der fragenden Person dringend empfehlen sich damit auseinander zusetzen.

Also:
Was ist die optisches Dichte/Extinktion? Wo von hängt sie hab?
Wenn du mir die beiden Fragen beantworten kannst (und die sind eigentlich echt verdammt leicht), dann erübrigt sich deine Frage Zwinkern

Kleiner Tipp:
http://de.wikipedia.org/wiki/Extinktion_%28Optik%29
http://de.wikipedia.org/wiki/Lambert-Beersches_Gesetz

Max der Esel · Gast

also Extinktion...wenn ich etwas mit Licht bestrahle, dann geht das Licht durch und wird zum Teil gestreut. Die Extinktion ist dann das eingestrahlte Licht minus das gestreute Licht.

abhängig ist sie von der Schichtdicke und von der konzentration der Stoffe/Zellen etc.

Das ist mir schon klar, aber ich weiß dann immer noch nicht welche OD ich dann habe unglücklich

Hedera · Anmeldungsdatum: 08.03.2011 Beiträge: 657

Du sagst es doch...
Die Extinktion ist abhängig von:
der Schichtdicke
der Konzentration
(und natürlich von den Eigenschaften der Probe (Absorbtionskoeffizent und so))

Mit dem Photometer willst du in der Regel wissen, wie hoch deine Konzentration der Probe ist oder du willst den Absorbtionskoeffizenten heraus finden (der beim selben Stoff immer gleich ist)
Wenn ich dir jetzt sage, dass in deiner 5ml Probe eine Konzentration von 5mg/ml drin ist (rein fiktiv), wie hoch ist die Konzentration in deiner 2ml Probe?

Max der Esel · Gast

2mL hat auch 5mg/mL

d.h. an den 5mL ist die höhere Streuung
an den 5mL ist das trnsmittierende Licht geringer als bei den 2mL
ergo ist die OD bei den 5mL höher, oder???

Hedera · Anmeldungsdatum: 08.03.2011 Beiträge: 657

Ok, dann fangen wir noch mal ganz vorne an:

1. Die Konzentration einer Stoffes in einer Lösung ist unabhängig von dem Volumen
2. Über das Lambert-Beersche-Gesetz kannst du diese Konzentration bestimmen, wenn du die Schichtdicker deiner Küvette kennst, den Absorbtionskoeffizienten und deine Extinktion/OD.

Extinktion= e * c * d
e =Absorbtionskoeffizent
c = Konzentration
d = Schichtdicke
(nach c umstellen)

Da sich, wie du schon gesagt hast die Konzentration durch Volumenänderung nicht ändert, ist das Gesetz Voulem unabhängig.
Also muss die Extinktion/OD gleich bleiben!

Weil gehst du davon aus, dass die Extinktion bei 5ml einer 5mg/ml konzentrierten Lösung höher ist als bei einer 2ml ebenfalls 5mg/ml konz.
Dann solltest du sehr schnell sehen, dass du als ergebnis zwei verschiedene Konzentrationen erhälst, was völliger unsinn ist.

Und das siehst du auch an den Küvetten. Es gibt Küvetten mit verschiedenem Füllvolumina, die aber immer die selbe Extinktion liefern.
Und das liegt eben daran, dass dein Photometer einen fest definierten Lichtstrahl zum messen nimmt. Der immer das selbe Probenvolumen vermisst und nicht das gesamte Porbevolumen in der Küvette. Würde er dies jedoch tun, könntest du die Extinktion durch nen einfach Dreisatz berechnet.
Angenommen der kleinst mögliche Messstrahl vermisst 1ml der Probe, gibt dir also die Extinktion für 1ml an, dann würde die Extinktion von 5ml 5 mal so hoch sein, wenn die ganze Probe vermessen wird (zB. mit einem Messstrahl der 5ml misst). Wie du dann auf 2 ml kommst, sollte dir bekannt sein.

Die Extinktion verändert sich nur dann, wenn du deine Konzentration verdünnst, was du tatsächlich sehr oft machen musst, wenn die Extinktion zu hoch ist (in der Regel sollte sie <1 sein). Und dann verändert sie sich genau um den Verdünnungsfaktor.

Konzentration ist 1:10 verdünnt, dann ist auch Extinktion um 1:10 geringer.