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bilos
Anmeldungsdatum: 03.10.2015
Beiträge: 5
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 Verfasst am: 03. Okt 2015 18:54 Titel: PCR |
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Meine Frage:
Hallo alle zusammen ich arbeite gerade mein Laborprotokoll nach und google mich zu zwei Fragen dumm und dämlich :-/ Vielleicht könnt ihr mir weiter helfen.
Woran liegt es, dass man neben dem gesuchten PCR Produkt auch kleinere DNA Fragmente amplifiziert werden?
Was ist die Template unabhängige Terminale Transferase Aktivität der Taq DNA Polymerase?
Meine Ideen:
Ich habe nichts dazu gefunden :-( |
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bilos
Anmeldungsdatum: 03.10.2015
Beiträge: 5
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| Verfasst am: 04. Okt 2015 17:46 Titel: |
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Kann mir keiner helfen?  |
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PaGe
Moderator
Anmeldungsdatum: 19.03.2007
Beiträge: 3549
Wohnort: Hannover
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| Verfasst am: 04. Okt 2015 18:46 Titel: |
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Ich zumindest nicht. Sorry.
Bei der ersten Frage habe ich eine Vermutung (taq-Polym. nicht fertig geworden (Zeitmangel bzw. mangelnde Anlieferung passender dNTPs) , aber das hilft dir wahrscheinlich auch nicht.
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Die deutsche Rechtschreibung ist Freeware, du darfst sie kostenlos nutzen. Aber sie ist nicht Open Source, d. h., du darfst sie nicht verändern oder in veränderter Form veröffentlichen. |
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Firelion
Anmeldungsdatum: 27.08.2009
Beiträge: 1878
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| Verfasst am: 04. Okt 2015 21:13 Titel: |
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Hi,
kurze PCR Fragmente können z.B. vorzeitige Ablösung der Primer entstehen. Ein Polymerisationsschritt endet nicht automatisch am Ende der Sequenz soneern, wenn es zur Denaturierung/ Ablösung kommt. Dadurch können zu lange und zu kurze Kopien entstehen. Durch Bindung des anderen Primers im nächsten Schritt wird die Anzahl der zu langen Kopien reduziert.
Außerdem kann es durch Primer- Dimer (Bindung der Primer aneinander) entstehen oder durch unspezifische Bindung von Primern zu kürzeren Fragmenten kommen.
Am Ende der PCR hat man aber normalerweise (hoffentlich) viel mehr des richtigen Produktzs der richtigen Länge wie zu kurze/ zu lange Sequeuen bzw falsche Sequenzen/ Primer Dimer.
Zum zweiten:
Template unabhängige terminale Transferaseaktivität meint, dass unabhängig vom Template (ohne komplementäre Sequenz) and das 3' Ende Nukleotide angefügt werden können.
LG,
Firelion
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It is well known that a vital ingredient of success is not knowing that what you’re attempting can’t be done - Terry Pratchett |
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bilos
Anmeldungsdatum: 03.10.2015
Beiträge: 5
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| Verfasst am: 05. Okt 2015 16:26 Titel: |
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Vielen lieben Dank für die Antwort  |
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