PCR

MagicAnna · Anmeldungsdatum: 31.08.2007 Beiträge: 4

Hallo!

Ich mache gerade eine Facharbeit, mein Thema lautet "PCR-Anwendungsmöglichkeiten in der Medizin und Kriminalistik"
Ich hab sie schon fast fertig, nur kommen mir noch einige Fragen auf, die mir bislang kein Buch beantworten konnte (weder Medizin noch Studium Bücher)

1.) Primer für die PCR werden künstlich hergestellt. Aber wie? Ich mein, jedes DNA ist anders gestaltet, dann müsste man doch jeden Primer individuell gestalten?! Und kann es nicht mal vorkommen, dass man theoretisch die Sequenz der Primer vervielfältigt, weil dazwischen keine Lücke mehr gibt, die man vervielfältigt?

2.) Werden die Polymerase "aufverbraucht" oder sind sie wieder für den neuen Zyklus vorhanden, nachdem die erste beendet ist? Dann hört doch die PCR theoretisch nie auf?

3.) Werden immer die gleichen Primer verwendet?

4.) Für die Analyse spielt die Kapillarelektrophorese eine große Rolle. Ich verstehe das Prinzip auch. Nur, überall steht hier, dass die DNA Fragmente nach Größe aufgeteilt wird. Aber alle DNA sind doch nach PCR gleich lang, dann lohnt es sich doch gar nicht mehr? Und wofür verwendet man unterschiedliche Farben? Oder wird jedes Nukleotid einzeln und extra gefärbt? Früher hat man mit den Bandenmuster gearbeite, heute wird es alles auf dem PC verzeichnet. Doch wie funktioniert das eigentlich?

Ich weiß, dass es viele Fragen sind, aber ich hoffe echt sehr, dass ihr mir da weiterhelfen könnt.

Vielen Dank im Voraus und liebe Grüße, Anna

PaGe · Moderator Anmeldungsdatum: 19.03.2007 Beiträge: 3549 Wohnort: Hannover

Hi Anna,

1. Die Primer kann man künstlich herstellen.
Schau mal hier http://www.chemgapedia.de/vsengine/vlu/vsc/de/ch/5/bc/vlus/oligonucleotidsynthese.vlu/Page/vsc/de/ch/5/bc/oligosynthese/oligosynthese.vscml.html und hier (wobei ich die Vorlesung mir nicht angeschaut habe) http://timms.uni-tuebingen.de/List/List01.aspx?clist=8441$2453

2. Man kennt mittlerweile Hitzestabile Polymerasen, die das Aufheizen vertragen und daher bis zum Ende arbeiten (mehr oder weniger hört die PCR damit nie auf.). Schau mal nach taq-Polymerase.

3. Für dasselbe Gen oder denselben Test ja, aber es gibt keinen Universal-Primer für alles, so dass immer für jede neue PCR erst einmal der Primer gefunden werden muss. Meist kennt man aber die Sequenz der flankierenden Teile, so dass man sich einen passenden Priomer bestellen kann.

4. Du bezieht dich wahrscheinlich auf die Sequenzierung nach Sanger. Hier erhälst du eben nicht gleichlange Fragmente, da du nur einen Primer hast (also nur von einer Seite anfängst) und die ddNTPs die Synthese abbrechen. Die ddNTPs sind in der Regel markiert, so dass ein Detektor genau weiß, womit das gefundene Segment endet.
Um eine Sanger-Sequenzierung zu machen, brauchst du aber erst einmal genug DNA (z.B. durch PCR).