PCR

Josh · Gast

Könnte mir eienr bitte sagen welchen Vorteil man hat mit dem Einsatz einer hitzestabilen DNA- Polymerase wie der Taq-Polymerase bei der Polymerasen Kettenreaktion(PCR).

Noctu

bei der PCR also Amplifikation von DNA-Stücken wird ein festgelegtes Temperatur-Profil abgefahren. Beim "aufschmelzen" der doppelstränigen DNA der können es um 90°C sein.
Da man alle Komponenten der PCR in einem Reaktionsgefäß hat ist eine Hitzestabilität der Komponenten und vor allem der Polymerase ( als Protein ) wünschenswert und erhöht die Ausbeute.

Wurstbrot · Anmeldungsdatum: 04.04.2005 Beiträge: 84 Wohnort: NRW

Mein Vorrdner hat Recht!

Ich versuche Dir das dennoch nochmal anders zu erklären:

Die PCR bedient sich der Tatsache, dass das Enzym POLYMERASE nach der Auftrennung der beiden DNA-Stränge in der Lage ist, die Sequenz abzulesen und aufzufüllen. Das heisst vereinfacht: Aus einer DOPPELKOPIE (die DNA eben) enstehen zwei EINZELKOPIEN, die dann brav von der Polymerase abgelesen und aufgefüllt werden. Dann entstehen aus EINEM ZWEI Stränge. Im nächsten Schritt aus ZWEI VIER. Dann aus VIER SECHZEHN und so weiter....

Damit sich aber die Stränge in der PCR-Reaktion aufteilen, sind Temperaturen notwendig, die gegen 95°C gehen...

Früher war es so, dass man eine normale Polymerase nutzte, wie Du und ich sie auch in den Zellen haben. Wir sind für 37°C ausgelegt und darum musste man nach jeden Heizschritt den Pott aufmachen, neue Polymerase zugeben und die nächste Runde konnte beginnen.

Irgendwann kam jemand auf die Idee, dass es auch Bakterien in heissen Quellen (z.B. in Gysieren) gibt und diese Bakterien hiessen "Thermophilius AQuatius". Deren Polymerasen mussten (und tuen sie auch) diese heissen Temperaturen aushalten - schwupps war die Taq- (von Thermophilius AQuatius) Polymerase gebohren.

Von nun an konnte man die PCR durchführen, indem man alles in einen Topf gab und die 30-40 Hitzewiederholungen ohne neue Zugabe der Polymerase durchführen konnte.

Prost

Gast

@ Wurstbrot:

Hallo!

Ich glaube du hast nicht ganz recht:
"EINEM ZWEI Stränge. Im nächsten Schritt aus ZWEI VIER. Dann aus VIER SECHZEHN und so weiter...."

Die mathematische Formel für alle PCR - Experimente müsste doch 2^n (2 hoch n) sein.

Im Klartext:
2^0 : keine Teilung : 1 Strang
2^1 : 1. Teilung : 2 Stränge
2^2 : 2. Teilung : 4 Stränge
2^3 : 3. Teilung : 8 Stränge
2^4 : 4. Teilung : 16 Stränge
2^5 : 5. Teilung : 32 Stränge

usw. ...

Die Menge an DNA - Strängen verdoppelt sich also mit jedem neuen Zyklus.

Mit freundlichen Grüßen!