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Nachricht |
Soppl
Gast
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 Verfasst am: 28. Jul 2014 14:58 Titel: PCR - Ende des Amplifikats |
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Meine Frage:
Hallo erstmal,
ich stehe im Moment vor einem kleinen Verständnisproblem bzgl. der PCR.
Angenommen, ich möchte eine bestimmte Teilsequenz eines Plasmids mittels PCR vervielfätigen. Ich benötige dazu 2 Primer, damit die Polymerase an den Grenzen besagter Teilsequenz ansetzen kann.
Sobald nun die PCR gestartet ist, beginnt die Polymerase einen komplementären Strang zu bilden.
Jetzt kommt meine Frage:
Wodurch wird denn beeinflusst, dass die Polymerase nicht einfach den kompletten DNA-Strang des Plasmids abarbeitet?
Meine Ideen:
Ich denke mal es wird damit zusammenhängen, dass wir jeweils einen Primer für die beiden komplementären DNA-Stränge des Templates benutzen. Aber genau erklären kann ich es mir leider nicht :(
Vielen Dank schonmal! |
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Soppl
Gast
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| Verfasst am: 28. Jul 2014 15:20 Titel: |
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Ok, ich versuchs nochmal mit einer Vermutung:
Die Polymerase arbeitet in der Tat zunächst über die Grenzen der Teilsequenz hinaus, jedoch werden diese langen DNA-Templates in der Folge nur linear vervielfältigt und die Sequenzen mit der korrekten Länge exponentiell, da die Primer immer an der gleichen Stelle ansetzen? |
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jörg
Anmeldungsdatum: 12.12.2010
Beiträge: 2107
Wohnort: Bückeburg
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| Verfasst am: 29. Jul 2014 18:16 Titel: |
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| Soppl hat Folgendes geschrieben: | | Die Polymerase arbeitet in der Tat zunächst über die Grenzen der Teilsequenz hinaus, jedoch werden diese langen DNA-Templates in der Folge nur linear vervielfältigt und die Sequenzen mit der korrekten Länge exponentiell, da die Primer immer an der gleichen Stelle ansetzen? |
Betrachten wir mal einen einzigen Strang: Daran bindet zunächst ein Primer und verlängert diesen zu einem komplementären Strang weit über die zweite Primerbindungsstelle hinaus (1.Zyklus). Im 2.Zyklus bindet an diesen neu erzeugten Strang nun der zweite Primer. Hier kann die Polymerase aber nicht über die erste Primerbindungsstelle hinaus lesen, da der Strang dort ja endet, weil im 1.Zyklus hier begonnen wurde. Die Konsequenz hast du richtig beschrieben:
| Soppl hat Folgendes geschrieben: | | jedoch werden diese langen DNA-Templates in der Folge nur linear vervielfältigt und die Sequenzen mit der korrekten Länge exponentiell |
_________________
RNA?- just another nucleic acid? |
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Soppl
Gast
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| Verfasst am: 30. Jul 2014 09:34 Titel: |
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Die Erklärung ist klasse!
Vielen Dank, Jörg  |
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