DNase leichter zu inaktivieren, als RNase. Warum?

freeway44 · Anmeldungsdatum: 15.03.2017 Beiträge: 1

Meine Frage:
Warum ist die DNase leichter zu inaktivieren, als RNase?

Meine Ideen:
Also die DNase braucht Mg Ionen als CoFaktor. Die kann man mit EDTA unterbinden. Ich schätze Mal, dass die RNase nicht zwingend darauf angewiesen ist.
Ist das so richtig oder liegt das an was anderem?

jörg · Anmeldungsdatum: 12.12.2010 Beiträge: 2107 Wohnort: Bückeburg

Das ist soweit richtig, doch würde ich dabei eher von Hemmung sprechen als von Inaktivierung, zumindest, wenn du nur einen Chelatbildner zusetzt.
Wenn es allein um das Austitrieren der Mg-Ionen ginge, würde auch Citrat ausreichen...
Aber DNase benötigt nicht nur Magnesium, sondern auch Calcium. Alternativ zum Magnesium kann auch Mangan das Zentralatom bilden. Deswegen reicht Citrat eben nicht aus und du benötigst schon einen Chelatbildner (EDTA oder EGTA).
Nichts desto trotz - wie gesagt eher Hemmung als Inaktivierung....

Ich finde die Denaturierung wichtiger: Während DNase relativ leicht durch Hitze (10min bei 65°C reichen aus) oder chemisch zu denaturieren ist, gibt es sehr hitzestabile RNasen (RNase A ist über längere Zeit bei über 100°C stabil). Zudem können manche RNasen nach chemischer Denaturierung wieder renaturiert werden (z.B. RNase A).

DNasen können beispielsweise sehr einfach durch ß-Mercaptoethanol oder SDS denaturiert oder zumindest nach Hitzedenaturierung in einem denaturierten Zustand gehalten werden. RNase A kann nach Denaturieren mit ß-Mercaptoethanol und Harnstoff wieder renaturieren, wenn Harnstoff und ß-Mercaptoethanol in Gegenwart von Sauerstoff eliminiert werden. Sie ist dann wieder voll funktionsfähig. Eine irreversible chemische Denaturierung wäre mit Perameisensäure möglich. Bei einigen RNasen handelt es sich also um sehr hartnäckige Enzyme, weswegen RNA-Biologen einen hohen Respekt davor haben und Nicht-RNA-Biologen, die mal hin und wieder RNA aufreinigen müssen, noch viel mehr.....